Caracterização biológica de um clone infeccioso do Citrus tristeza virus (CTV) de origem brasileira, utilização do vetor viral CTV para o controle de Candidatus Liberibacter asiaticus e método multiplex de detecção das bactérias associadas ao Huanglongbing

• Autor(a) principal: Martins, Elaine Cristina
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: https://hdl.handle.net/11449/251059
• topic: Vetor viral; Citrus tristeza virus; Huanlongbing; Antimicrobiano; qPCR

A citricultura tem notável importância econômica para o Brasil, sendo responsável por 76% do comércio mundial de suco de laranja. Porém, tem enfrentado situações adversas como a sucessão de doenças, sendo atualmente a mais devastadora o Huanglongbing (HLB), causada pelas bactérias Candidatus Liberibacter asiaticus (Las) e Candiudatus Liberibacter americanus (Lam) e transmitidas pelo inseto vetor Diaphorina citri. Pela ausência de cultivares cítricos comerciais com caráter resistentes ao HLB, faz-se necessário a busca de resistência por meio de melhoramento genético convencional ou através da biotecnologia. Este trabalho teve como objetivo empregar o vetor viral Citrus tristeza virus (CTV) para expressar genes com ação antimicrobiana, destacando a vantagem de o vírus colonizar as células do floema, mesmo local de colonização das liberibactérias. Além disso, neste trabalho foi realizado o sequenciamento e avaliação biológica do primeiro clone infeccioso CTV de origem brasileira (PIAC-VT). Os resultados obtidos confirmaram que a construção do clone PIAC-VT foi alcançada com sucesso tanto in vitro quanto in vivo, com um genoma de 19252 pb. O vírus PIAC-VT manteve suas características biológicas como replicação, movimento e indução de sintomas após os processos de sua clonagem, possibilitando cumprir os postulados de Koch. As plantas de citros contendo os vírus CTV expressando os antimicrobianos foram desafiadas com a inoculação de Las e foram avaliadas por qPCR multiplex por um período de 238 dias. Não houve, entretanto, controle de Las com os genes de interesse utilizados. O método de qPCR empregado para detecção e quantificação bacteriana desenvolvido neste trabalho demonstrou ser seguro, sensível e específico para detectar Las, Lam e fitoplasma do grupo 16SrIX numa única reação, podendo ser empregado para citros e psilídeos. Embora, os peptídeos antimicrobianos expressos via vetor CTV não mostraram efeito bactericida ou bacteriostático contra Las, a manipulação bem-sucedida do vetor viral CTV é uma conquista significativa, pois possibilitou a incorporação da tecnologia de uso do vetor CTV no Brasil. Com base nos resultados, podemos afirmar que o clone infeccioso PIAC-VT é funcional e pode ser uma nova ferramenta de estudos de genética reversa a ser aplicada aos citros, podendo ser aplicado na busca de uma citricultura mais sustentável e produtiva.