Modulação do EGFR em complexos cumulus-oócitos bovinos cultivados in vitro e seus efeitos sobre o metabolismo, maturação e aquisição da competência oocitária e a transcrição gênica das células do cumulus e dos embriões

• Autor(a) principal: Dall'Acqua, Priscila Chediek [UNESP]
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/157301
• topic: Conteúdo lipídico; Desenvolvimento embrionário; Maturação oocitária in vitro; Sinalização do EGFR

O receptor do fator de crescimento epidermal (EGFR) está relacionado com a retomada da meiose induzida por estímulo gonadotrófico. Nós utilizamos um inibidor do EGFR (AG1478) para inibir a retomada da meiose durante a pré-maturação (PMIV). No experimento I, foi avaliada a maturação oocitária, a expansão das células do cumulus, a funcionalidade das junções gap, a distribuição dos microfilamentos de actina e o conteúdo lipídico em oócitos e, a expressão gênica nas células do cumulus. No experimento II, foi avaliado o desenvolvimento embrionário, a taxa de eclosão, o número total de células, a taxa de apoptose, o conteúdo lipídico e expressão gênica nos embriões. No experimento I, os COC foram PMIV por 8h em meio com 1 μM de AG1478, inibidor do EGFR, (EGFR-_PreIVM), em seguida foram MIV por 22h (EGFR-_IVM); foram feitos 4 grupos controle: oócitos imaturos imediatamente após sua remoção do folículo (Control_Immat), oócitos MIV por 8h (Control_PreIVM), por 22h (Control_IVM_22h) e por 30h (Control_IVM_30h). No experimento II, os COC foram PMIV por 8h em meio com 1 μM do inibidor do EGFR, em seguida foram MIV por 22h (EGFR-); os COC do grupo controle foram MIV por 22h (Control). Em seguida, os oócitos foram FIV e cultivados por até 9 dias. No experimento I, o grupo EGFR-_PreIVM apresentou 53,1% dos oócitos em GV, com a maioria em GV1 (42,9%; P>0,05) ou em GV3 [28,6%, semelhante ao grupo Control_Immat (P>0,05) e menor que o grupo Control_PreIVM (P<0,05)]; após a MIV não foram encontradas diferenças (P>0,05) entre os grupos nas taxas de MII, mas o grupo Control_IMV_30h (9,1%) teve maiores (P<0,05) taxas de oócitos degenerados. A expansão das células do cumulus foi menor (P<0,05) no grupo EGFR-_PreIVM e as junções gap se mantiveram funcionais (P<0,05). Os microfilamentos de actina não diferiram entre os grupos (P>0,05) e estavam em sua maioria na categoria normal. O conteúdo lipídico foi menor (P<0,05) no grupo EGFR-_PreIVM comparado com Control_Immat, mas após a MIV foi maior (P<0,05) no grupo EGFR-_IVM do que no Control_IVM. Diferenças na expressão dos genes de maturação oocitária, expansão das células do cumulus, metabolismo, metabolismo lipídico, qualidade e desenvolvimento embrionário, regulação epigenética, estresse do retículo endoplasmático, defesa antioxidante e apoptose foram observadas após a PMIV e; nos genes de expansão das células do cumulus, metabolismo e qualidade embrionária após a MIV. No experimento II, as taxas de blastocistos, de eclosão, o número total de células e o conteúdo lipídico não diferiram (P>0,05) nos embriões avaliados. A apoptose foi menor (P<0,05) no grupo EGFR-. Os genes NANOG, RPLP0, H2AFZ, HMGCS1, ACSL1, GPAT3, FADS2, FASN, FDX1, BID, GPX4 e HIF1A foram mais expressos (P<0,05) no grupo EGFR-. Em conclusão o tratamento com inibidor do EGFR proporcionou bloqueio parcial da meiose com manutenção das junções gap funcionais, que foi relacionado com maior potencial de desenvolvimento dos oócitos, devido à redução da apoptose nos embriões e ao aumento na expressão de genes relacionados com desenvolvimento, sugerindo melhor qualidade embrionária.