Otimização de ELISA empregando a proteína Tc85-11 e planejamento fatorial
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Data de Publicação: | 2006 |
Outros Autores: | , , , |
Tipo de documento: | Artigo |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UNESP |
Texto Completo: | http://dx.doi.org/10.1590/S0100-46702006000100008 http://hdl.handle.net/11449/8034 |
Resumo: | A doença de Chagas é causada pelo Trypanosoma cruzi (T. cruzi) e a detecção de anticorpos anti-T. cruzi no soro é um método para diagnosticar a doença. Neste trabalho, ELISA indireto foi otimizado para a detecção de anticorpos no soro de pacientes com doença de Chagas empregando a proteína Tc85-11 (Ag) da superfície do parasita tripomastigota. Na otimização das condições experimentais foi aplicado planejamento fatorial completo para os parâmetros tempo de incubação, diluições do Ag (0,08 mg mL-1), anticorpo primário (Ac) e anti-IgG conjugada com a peroxidase (Ac*). Os melhores resultados foram obtidos nas seguintes condições: 0,14 mg Ag/poço, 60 min para o tempo de incubação, diluições de 1:35 e 1:1000 para Ac e Ac*, respectivamente. O valor do limiar de reatividade (cut off) foi A450nm = 0,371. O ELISA indireto foi aplicado em amostras de soros de pacientes infectados com doença de Chagas e pacientes com diferentes doenças sistêmicas. A proteína Tc85-11, a qual está envolvida com a adesão do parasita na célula hospedeira, é também apropriada para o diagnóstico sorológico da doença de Chagas. |
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Otimização de ELISA empregando a proteína Tc85-11 e planejamento fatorialOptimization of ELISA using Tc85-11 protein and factorial designT. cruziTc85-11ELISAdoença de ChagasT. cruziTc85-11ELISAChagas' diseaseA doença de Chagas é causada pelo Trypanosoma cruzi (T. cruzi) e a detecção de anticorpos anti-T. cruzi no soro é um método para diagnosticar a doença. Neste trabalho, ELISA indireto foi otimizado para a detecção de anticorpos no soro de pacientes com doença de Chagas empregando a proteína Tc85-11 (Ag) da superfície do parasita tripomastigota. Na otimização das condições experimentais foi aplicado planejamento fatorial completo para os parâmetros tempo de incubação, diluições do Ag (0,08 mg mL-1), anticorpo primário (Ac) e anti-IgG conjugada com a peroxidase (Ac*). Os melhores resultados foram obtidos nas seguintes condições: 0,14 mg Ag/poço, 60 min para o tempo de incubação, diluições de 1:35 e 1:1000 para Ac e Ac*, respectivamente. O valor do limiar de reatividade (cut off) foi A450nm = 0,371. O ELISA indireto foi aplicado em amostras de soros de pacientes infectados com doença de Chagas e pacientes com diferentes doenças sistêmicas. A proteína Tc85-11, a qual está envolvida com a adesão do parasita na célula hospedeira, é também apropriada para o diagnóstico sorológico da doença de Chagas.Chagas' disease is caused by the Trypanosoma cruzi (T. cruzi) and the detection of anti-T. cruzi antibodies in the serum is a method for diagnosis of the disease. In this work, indirect ELISA was optimized for detection of antibodies in patients' sera with Chagas' disease using Tc85-11 protein (Ag) from the trypomastigote surface of the parasite. The full factorial design for optimization of the experimental conditions was carried out for the incubation time, dilutions of Ag (0.08 mg mL-1), primary antibody (Ac) and anti-IgG conjugated with peroxidase (Ac*) parameters. The best results were obtained with the following conditions: 0.14 mg Ag/well, 60 min incubation time, dilutions of 1:35 and 1:1000 for Ac and Ac*, respectively. The cut off value was A450nm = 0.371. The indirect ELISA was applied to sera Chagas' disease infected patients samples and patients with different systemic diseases. Tc85-11 protein, which is involved in the adhesion of the parasite to host cell, is also suitable for serological diagnosis of Chagas' disease.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Centro Univ. Barão Mauá Faculdade de Ciências FarmacêuticasUnesp Faculdade de Ciências FarmacêuticasUnesp Instituto de QuímicaUnesp Faculdade de Ciências FarmacêuticasUnesp Instituto de QuímicaEditora UnespCentro Univ. Barão Mauá Faculdade de Ciências FarmacêuticasUniversidade Estadual Paulista (Unesp)Zanoni, T. B.Carlos, I. Z. [UNESP]Tognolli, J. O. [UNESP]Yamanaka, H. [UNESP]Ferreira, A. A. P. [UNESP]2014-05-20T13:25:23Z2014-05-20T13:25:23Z2006-01-01info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/article63-71application/pdfhttp://dx.doi.org/10.1590/S0100-46702006000100008Eclética Química. Fundação Editora da Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho - UNESP, v. 31, n. 1, p. 63-71, 2006.0100-4670http://hdl.handle.net/11449/803410.1590/S0100-46702006000100008S0100-46702006000100008S0100-46702006000100008.pdfSciELOreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESPporEclética Químicainfo:eu-repo/semantics/openAccess2023-11-14T06:14:50Zoai:repositorio.unesp.br:11449/8034Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.unesp.br/oai/requestopendoar:29462024-08-05T17:40:47.120282Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)false |
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