Padronização de protocolo utilizando partículas magnéticas para extração de DNA do circovírus suíno (PCV)

• Autor(a) principal: Silva, Bruna Lindolfo da
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/237202
• topic: PCV; DNA; Extração de ácido nucleico; Partículas magnéticas; PCR quantitativa (qPCR); Nucleic acid extraction; Magnetic particles; Quantitative PCR (qPCR)

O Brasil ocupa o quarto lugar no ranking mundial de exportação de carne suína e para alcançar tais índices zootécnicos, os produtores necessitam do controle de várias doenças emergentes em suínos, sendo a identificação e prevenção fatores essenciais. Dentre as principais doenças, destaca-se a circovirose suína, tendo o circovírus suíno 2 (PCV-2) como agente etiológico. O diagnóstico da circovirose suína se dá por meio dos sinais clínicos associados a testes laboratoriais. A utilização da PCR quantitativa (qPCR) para a determinação da concentração do DNA viral vem sendo considerada o método de escolha neste contexto devido ao alto poder de detecção e na rapidez para obtenção dos resultados. Entretanto, a aplicabilidade desta técnica a torna problemática, devido ao alto custo para a aquisição dos insumos. Um dos principais fatores associados ao elevado custo é a utilização de kits comerciais para extração do ácido nucleico. Grande parte desses insumos são adquiridos pela importação, o que além de refletir no aumento do valor devido a logística, podem ocasionar problemas na produção devido a fatores externos como alta demanda e falta de matéria prima. Com isso, este trabalho teve como objetivo padronizar uma metodologia simples para a extração de DNA, a fim de proporcionar a otimização das análises moleculares para o diagnóstico do PCV em diferentes amostras. O protocolo desenvolvido foi aplicado em amostras de saliva, sangue total e soro de suínos infectados naturalmente. Os produtos das extrações utilizando o protocolo desenvolvido foram submetidas às análises de qPCR para a quantificação do DNA do PCV. Adicionalmente, a análise de integridade do ácido nucleico pela espectrofotometria UV-Vis foi realizada para obtenção dos dados de pureza do material extraído. Dois kits comerciais, um baseado na metodologia de extração por coluna de sílica e o outro por partículas magnéticas, foram utilizados a fim de comparar a eficiência do protocolo proposto. Os protocolos desenvolvidos neste trabalho apresentaram eficiência similar aos kits comerciais para a extração de DNA do PCV para os três tipos de amostras. Todos os protocolos de extração adotados apresentaram baixa pureza em relação às razões 260/280 e 260/230, porém tal fato não interferiu na análise por qPCR. Fatores como simplicidade de execução e possibilidade de automação favorecem a sua utilização.