Potencial bioativo de scaffolds de nanofibras de policaprolactona contendo hidróxido de cálcio e associados à fibronectina sobre células pulpares humanas

• Autor(a) principal: Oliveira, Caroline Anselmi de
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/204310
• topic: Polpa dentária; Nanofibras; Hidróxido de cálcio; Fibronectinas; Expressão gênica; Dental pulp; Nanofibers; Calcium; Fibronectins; Gene expression

O objetivo do presente estudo foi sintetizar e caracterizar scaffolds de nanofibras a base de policaprolactona (PCL) incorporados com hidróxido de cálcio (HC), e avaliar seu potencial tóxico e bioativo sobre células da polpa dental humana (HDPCs) quando associados à fibronectina (FN). Inicialmente, concentrações de HC (0,1%; 0,2% ou 0,4%) foram incorporadas a scaffolds de PCL confeccionados por electrospinning. Scaffolds sem HC serviram como controle. Os scaffolds foram caracterizados quanto à morfologia por MEV associada à análise por EDS (n=4). Também foram analisados quanto a solubilidade, alteração de pH do meio e liberação de cálcio (n=8). Então, HDPCs foram cultivadas sobre os scaffolds e avaliadas quanto a viabilidade (alamarBlue, n=8; ensaio de Live/Dead n=4) nos períodos de 1, 7 e 14 dias, e adesão e espalhamento (F-actina, n=4) em 1, 3 e 7 dias do cultivo celular. O aumento da concentração de HC ampliou o diâmetro das nanofibras sem interferir na porcentagem de espaços interfibrilares e aumentou a liberação de cálcio, mantendo a neutralidade do meio (pH 7,0-8,0). Em comparação ao grupo controle, aumento significativo de viabilidade celular foi observado apenas para o grupo contendo HC 0,4%, em todos os períodos. Portanto, na segunda fase, scaffolds contendo ou não 0,4% de HC foram adsorvidos com FN (20 µg/mL). HDPCs semeadas na superfície foram avaliadas quanto a viabilidade, adesão e espalhamento, migração (Trans-well; n=4), expressão gênica de marcadores de diferenciação odontogênica (RT-qPCR; n=6), atividade de fosfatase alcalina (ALP; n=8) e formação de nódulos de mineralização (Alizarin red; n=8). Os dados foram submetidos a ANOVA e pós testes de Tukey, Games-Howell ou Sidak (α=5%). Os resultados de Live/Dead e F-actina foram avaliados qualitativamente. A incorporação de HC e FN nos scaffolds, isolados ou em associação, aumentou a capacidade de migração celular, além de permitir um melhor espalhamento citoplasmático, intensificado quando houve associação. O mesmo foi visto para a viabilidade celular. A expressão de ALPL e DSPP não foi regulada pela presença de HC e/ou FN, assim como a atividade de ALP. Regulação negativa do gene COL1A1 foi observada em todos os grupos experimentais quando comparados ao controle, enquanto o gene DMP1 foi superexpresso na presença de HC. O HC favoreceu a formação de matriz mineralizada, a qual não foi influenciada pela presença de FN. Assim, foi possível concluir que a incorporação de 0,4% de HC a scaffolds de PCL proporcionou topografia de superfície e propriedades favoráveis à adesão, espalhamento, proliferação e expressão do fenótipo odontogênico por HDPCs. Entretanto, apenas viabilidade, espalhamento e migração celular foram intensificados na presença de FN.