Caracterização de mreB de Xanthomonas citri subsp. citri codificando uma actina bacteriana

• Autor(a) principal: Pereira, Camila Malvessi
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/181581
• topic: MreB; Morfologia bacteriana; Cancro cítrico; Citrus canker; Bacterial morphology

Xanthomonas citri subsp. citri (X. citri) é o agente etiológico do cancro cítrico, uma doença que ataca todas as variedades comerciais de citros, causando prejuízos econômicos em vários países produtores. Em áreas endêmicas, o cancro cítrico é controlado principalmente por aplicação de bactericidas cúpricos. Compostos alternativos para controlar a doença são desejáveis, pois os bactericidas cúpricos causam impactos ambientais e podem induzir resistência em X. citri. Um passo importante para a descoberta e avaliação de novos compostos para controle de X. citri é a caracterização de genes/proteínas que são alvos em potencial. O gene mreB codifica para uma proteína que é uma actina bacteriana com papel-chave na determinação da morfologia celular. Esses genes foram caracterizados em algumas bactérias, nas quais foi demonstrado que são essenciais. Não existem relatos da caracterização de mreB em X. citri. A proteína MreB e a actina tem baixa similaridade de sequência, apesar de serem homólogos funcionais. Essas características fazem de MreB um alvo interessante para novos compostos antibacterianos. Os objetivos deste trabalho foram descrever a função e determinar a localização subcelular de MreB em X. citri. Para estudar a função de MreB, duas estratégias foram usadas para deletar o gene mreB em X. citri. Entretanto, não foi possível obter mutantes deletados para mreB nem na ausência, nem na presença de complementação. Esse resultado evidenciou que mreB é essencial para X. citri e mostrou que o método de complementação utilizado não foi adequado para manter a viabilidade de X. citri. Para investigar a localização subcelular de MreB em X. citri, uma fusão em sanduíche de MreB com GFP foi desenvolvida, e células expressando a fusão foram visualizadas por microscopia de fluorescência e de contraste de fase. As imagens de microscopia de fluorescência e de contraste de fase obtidas de X. citri expressando a fusão em sanduíche mostraram células com morfologia de bastonete com manchas de fluorescência predominantemente na periferia da célula. Essas imagens evidenciaram que a fusão em sanduíche foi expressa com sucesso em X. citri sem efeitos negativos detectáveis para as células. Essas imagens também revelaram pela primeira vez que a distribuição subcelular de MreB em X. citri é muito similar àquela vista na literatura em outras bactérias. Os resultados deste trabalho, além de terem expandido o conhecimento da biologia de X. citri, poderão ser utilizados em futuras avaliações de compostos químicos para controle do cancro cítrico.