Investigando possíveis interações físicas entre componentes do sistema de detecção de fosfato e do sistema de secreção tipo III em Xanthomonas citri subsp. citri

• Autor(a) principal: Mello, Jéssica Alcimari Ferreira
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/181741
• topic: T3SS; TCS PhoR/PhoB; Expressão heteróloga; Purificação de proteínas

Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) é um fitopatógeno responsável por causar o Cancro Cítrico, relacionado a grandes perdas econômicas para a citricultura. Esta bactéria utiliza diversos mecanismos moleculares para infectar o hospedeiro, dentre eles, o Sistema de Secreção Tipo III (T3SS), considerado o principal fator de virulência expresso in planta pela Xac. Sabe-se que a ativação do T3SS é controlada por dois reguladores: HrpG e HrpX. Porém, os mecanismos que controlam estes reguladores e posteriormente a expressão do T3SS in planta ainda são pouco compreendidos. Estudos realizados por nosso grupo de pesquisa sugerem que a concentração de fosfato inorgânico (Pi) presente em meio de cultura ou em espaço apoplástico, onde a Xac causa a infecção em plantas, pode estar relacionado com a ativação do T3SS, sugerindo uma possível relação entre o Pi com os reguladores HrpG e HrpX. Em Xac, a detecção e transportorte do Pi é realizada pelo sistema de dois componentes (TCS) PhoR/PhoB, codificado pelo operon pho. Afim de averiguar a possível relação entre PhoR/PhoB com os reguladores do T3SS HrpG e HrpX, ensaios de modelagem molecular foram realizados, indicando que a proteína PhoR poderia interagir fisicamente com HrpG, fosforilando-a, e sugerindo um possível mecanismo de interação entre o TCS PhoR/PhoB e os genes reguladores do T3SS. Para testar a hipótese de interação física entre HrpG e PhoR, as proteínas recombinantes PhoR, PhoB e HrpG de Xac foram expressas em células de Escherichia coli BL21 com a finalidade de realização de ensaios de pull-down. Através da purificação por cromatografia de afinidade em coluna de Ni2+-Sepharose, as proteínas HrpG e PhoB recombinantes foram obtidas com alto grau de pureza e na forma solúvel. Entretanto a proteína PhoR se mostrou insolúvel em todos os testes de purificação e de renaturação realizados, impossibilitando a realização dos ensaios de interação física até o momento. De qualquer modo, este trabalho representa importantes avanços sobre a regulação do T3SS em Xac, tendo em vista que até o atual momento configura-se como o primeiro estudo relacionando o TCS PhoR/PhoB com HrpG.