Terapia fotodinâmica antimicrobiana com utilização da Clorina e6 em biofilmes monoespécie de Fusobacterium nucleatum e Porphyromonas gingivalis
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2023 |
Tipo de documento: | Trabalho de conclusão de curso |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UNESP |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/11449/242829 |
Resumo: | A Raspagem e Alisamento Radicular (RAR) é considerada a terapia não-cirúrgica de escolha para tratamento da doença periodontal. No entanto, esta terapia pode apresentar limitações e insucessos quando utilizada isoladamente em determinados casos clínicos. Assim, terapias alternativas têm sido investigadas para suprir deficiências da RAR que podem estar relacionadas ao limitado acesso à superfície radicular, a presença persistente de periodontopatógenos nas bolsas mais profundas e a habilidade de algumas bactérias em invadir tecidos adjacentes. Dentre estas terapias, destaca-se a terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT). O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da aPDT com utilização da clorina-e6 (Ce6) em diferentes concentrações e comprimentos de onda em biofilme monoespécie de Fusobacterium nucleatum e Porphyromonas gingivalis. Foi realizada a padronização da formação do biofilme seguindo parâmetros de densidade óptica e contagem de colônias conforme curva de crescimento estabelecida previamente. Os biofilmes monoespécie de F. nucleatum e de P. gingivalis foram formados em condições de atmosfera e meio de crescimento adequadas por 5 dias. Posteriormente, estes biofilmes foram tratados com diferentes protocolos, incluindo controle positivo (clorexidina – CHX 0,2%) e negativo (água destilada + DMSO 1%), grupos tratados apenas com fotossensibilizador (FS), grupos tratados apenas com luz e grupos tratados com aPDT (FS + luz). Foram testadas duas concentrações da Ce6 (100 e 200 μM), dois comprimentos de onda (emitidos em azul e vermelho) e uma intensidade de luz (30 J/cm2). A análise quantitativa foi realizada por contagem de colônias e transformadas em UFC/mL. A distribuição dos dados foi verificada por meio de teste de Shapiro Wilk, com posterior análise de variância (ANOVA) de um fator com correção de Welch e pós teste de Games-Howell, considerando um nível de significância de 5%. A aPDT com irradiação da Ce6 nos dois espectros de luz promoveu a eliminação total de P. gingivalis em ambas as concentrações de FS testadas. Por outro lado, a irradiação com luz vermelha foi mais eficaz na eliminação de F. nucleatum, provocando redução microbiana de 3,44 e 3,46 log10 para a menor e maior concentração de Ce6, respectivamente, quando comparadas ao controle negativo. Tendo em vista o significativo efeito antimicrobiano sobre biofilme de bactérias periodontopatogênicas como a P. gingivalis e F. nucleatum, a aPDT com utilização da Ce6 pode ser considerada uma alternativa promissora de terapia coadjuvante à RAR no tratamento da doença periodontal. |
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Terapia fotodinâmica antimicrobiana com utilização da Clorina e6 em biofilmes monoespécie de Fusobacterium nucleatum e Porphyromonas gingivalisAntimicrobial Photodynamic Therapy with the Use of Chlorine e6 in Monospecies Biofilms of Fusobacterium nucleatum and Porphyromonas gingivalisFotoquimioterapiaBiofilmesPeriodontiteMicrobiologiaMicrobiologyPhotochemotherapyBiofilmsPeriodontitisA Raspagem e Alisamento Radicular (RAR) é considerada a terapia não-cirúrgica de escolha para tratamento da doença periodontal. No entanto, esta terapia pode apresentar limitações e insucessos quando utilizada isoladamente em determinados casos clínicos. Assim, terapias alternativas têm sido investigadas para suprir deficiências da RAR que podem estar relacionadas ao limitado acesso à superfície radicular, a presença persistente de periodontopatógenos nas bolsas mais profundas e a habilidade de algumas bactérias em invadir tecidos adjacentes. Dentre estas terapias, destaca-se a terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT). O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da aPDT com utilização da clorina-e6 (Ce6) em diferentes concentrações e comprimentos de onda em biofilme monoespécie de Fusobacterium nucleatum e Porphyromonas gingivalis. Foi realizada a padronização da formação do biofilme seguindo parâmetros de densidade óptica e contagem de colônias conforme curva de crescimento estabelecida previamente. Os biofilmes monoespécie de F. nucleatum e de P. gingivalis foram formados em condições de atmosfera e meio de crescimento adequadas por 5 dias. Posteriormente, estes biofilmes foram tratados com diferentes protocolos, incluindo controle positivo (clorexidina – CHX 0,2%) e negativo (água destilada + DMSO 1%), grupos tratados apenas com fotossensibilizador (FS), grupos tratados apenas com luz e grupos tratados com aPDT (FS + luz). Foram testadas duas concentrações da Ce6 (100 e 200 μM), dois comprimentos de onda (emitidos em azul e vermelho) e uma intensidade de luz (30 J/cm2). A análise quantitativa foi realizada por contagem de colônias e transformadas em UFC/mL. A distribuição dos dados foi verificada por meio de teste de Shapiro Wilk, com posterior análise de variância (ANOVA) de um fator com correção de Welch e pós teste de Games-Howell, considerando um nível de significância de 5%. A aPDT com irradiação da Ce6 nos dois espectros de luz promoveu a eliminação total de P. gingivalis em ambas as concentrações de FS testadas. Por outro lado, a irradiação com luz vermelha foi mais eficaz na eliminação de F. nucleatum, provocando redução microbiana de 3,44 e 3,46 log10 para a menor e maior concentração de Ce6, respectivamente, quando comparadas ao controle negativo. Tendo em vista o significativo efeito antimicrobiano sobre biofilme de bactérias periodontopatogênicas como a P. gingivalis e F. nucleatum, a aPDT com utilização da Ce6 pode ser considerada uma alternativa promissora de terapia coadjuvante à RAR no tratamento da doença periodontal.Root scaling and planing (RAR) is considered the non-surgical therapy of choice for the treatment of periodontal disease. However, this therapy may present limitations and failures when used alone in certain clinical cases. Thus, alternative therapies have been investigated to overcome RAR deficiencies that may be related to limited access to the root surface, the persistent presence of periodontopathogens in deeper pockets and the ability of some bacteria to invade adjacent tissues. Among these therapies, antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) stands out. The aim of this study was to evaluate the effect of aPDT with the use of chlorin-e6 (Ce6) at different concentrations and wavelengths on a single species biofilm of Fusobacterium nucleatum and Porphyromonas gingivalis. The standardization of biofilm formation was carried out following parameters of optical density and colony count according to the previously established growth curve. The monospecies biofilms of F. nucleatum and P. gingivalis were formed under appropriate conditions of atmosphere and growth medium for 5 days. Subsequently, these biofilms were treated with different protocols, including positive control (chlorhexidine - CHX 0.2%) and negative control (distilled water + DMSO 1%), groups treated only with photosensitizer (PS), groups treated only with light and groups treated with aPDT (FS + light). Two concentrations of Ce6 (100 and 200 μM), two wavelengths (emitted in blue and red) and one light intensity (30 J/cm2) were tested. Quantitative analysis was performed by counting colonies and transforming them into CFU/mL. Data distribution was verified using the Shapiro Wilk test, with subsequent one-way analysis of variance (ANOVA) with Welch correction and post Games-Howell test, considering a significance level of 5%. aPDT with Ce6 irradiation in both light spectra promoted the total elimination of P. gingivalis in both PS concentrations tested. On the other hand, irradiation with red light was more effective in eliminating F. nucleatum, causing a microbial reduction of 3.44 and 3.46 log10 for the lowest and highest concentration of Ce6, respectively, when compared to the negative control. In view of the significant antimicrobial effect on the biofilm of periodontopathogenic bacteria such as P. gingivalis and F. nucleatum, aPDT using Ce6 can be considered a promising alternative for adjuvant therapy to RAR in the treatment of periodontal disease.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)CNPq: 1743 / 2020-1Universidade Estadual Paulista (Unesp)Zandim-Barcelos, Daniela Leal [UNESP]Universidade Estadual Paulista (Unesp)Lessa, Júlia Batista2023-04-04T19:16:56Z2023-04-04T19:16:56Z2023-02-28info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/11449/242829porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESP2023-10-02T06:08:12Zoai:repositorio.unesp.br:11449/242829Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.unesp.br/oai/requestopendoar:29462024-08-05T13:49:07.068574Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)false |
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