Estudo da afinidade das proteínas rTgMIC1 e rTgMIC4 da Toxoplasma gondii com fetuína e asialofetuína utilizando técnica piezelétrica

• Autor(a) principal: Santos, Adriano dos [UNESP]
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/92055
• topic: Físico-química; Proteínas; Lectinas; Proteins; Lectins

As proteínas de micronema TgMIC1 e TgMIC4 (TgMICs) da Toxoplasma gondii fazem parte de um complexo proteico localizado na superfície do parasita responsável pelo processo de adesão e invasão celular. Os objetivos desse trabalho foram estudar dispositivos piezelétricos contendo em cada um, uma das MICs recombinantes (rTgMIC1 ou rTgMIC4) e utilizá‐los na determinação das constantes de afinidade entre elas com a fetuína e asialofetuína, empregando o modelo da Isoterma de Langmuir. Os dispositivos foram desenvolvidos por meio a abordagem de monocamadas automontadas (SAM) mista de tióis, utilizando solução etanólica contendo 2,5 mM de ácido 11‐mercaptoundecanóico (11‐MUA) e 7,5 mM de 6‐mercapto‐1‐hexanol (C6OH). A formação da SAM, realizada em temperatura ambiente por 12 h, foi monitorada pela técnica de Microbalança a Cristal de Quartzo com Fator Dissipativo (QCM‐D) e voltametria cíclica utilizando o par redox [FeII(CN)6]4‐/ FeIII(CN)6]3‐. Os resultados obtidos por ambas as técnicas evidenciaram a formação de SAM rígida e de elevado grau de cobertura superficial após cinética lenta em que processos de adsorção e organização dos tióis ocorreram simultaneamente. Para a imobilização das rTgMICs, solução aquosa contendo 10 mM de EDC (N‐etil‐N‐(dimetilaminopropil) carbodiimida) e 20 mM de NHS (N‐hidroxisuccinimida) foi utilizada para a ativação dos grupos carboxílicos presentes na SAM por 2 h, e o processo acompanhado por QCM‐D apresentou resultados compatíveis com aqueles encontrados na literatura. Pela mesma técnica, foi possível verificar que ambas as rTgMICs se imobilizam sobre o cristal de quartzo após sua incubação com solução 0,15 mg/mL de cada rTgMIC em tampão Tris‐HCl contendo 200 mM de NaCl...