Efeito da N-acetilcisteína em biofilme de Candida albicans

• Autor(a) principal: Nunes, Thaís Soares Bezerra Santos
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/182012
• topic: Acetilcisteína; Biofilmes; Matriz extracelular; Candida albicans; Farmacorresistência fúngica; Acetylcysteine; Biofilms; Extracellular matrix; Candida albicans; Fungal drug resistance

Candida albicans (Ca) é o principal fungo patógeno humano, responsável por infecções como a candidose orofaríngea e a candidemia. Essas infecções estão fortemente associadas com a formação de biofilmes. O uso abusivo de antifúngicos tem levado ao desenvolvimento de resistência fúngica. As terapias direcionadas aos biofilmes, principalmente contra a matriz extracelular (MEC), são relevantes para o desenvolvimento de novos tratamentos mais eficazes. Um dos agentes que tem demonstrado ação antibiofilme é a N-acetilcisteína (NAC). Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a ação da NAC em biofilmes in vitro de C. albicans susceptível (CaS) e resistente ao fluconazol (CaR). Culturas planctônicas de CaS e CaR foram cultivadas e submetidas ao teste de susceptilidade à NAC. Foram determinadas também a curva de inativação de ambas as cepas sob ação da NAC, seu efeito na formação do biofilme e no biofilme maduro. Por fim, foi avaliada a ação NAC na composição da MEC do biofilme, por meio da quantificação de peso seco total e do precipitado, polissacarídeos solúveis em água (WSP) e álcali (ASP), proteínas do sobrenadante e do precipitado e DNA extracelular (eDNA). Os dados obtidos foram analisados descritivamente e pelos testes ANOVA/Welch e Tukey/Gomes-Howell ou Kruskal-Wallis (=0,05). A concentração inibitória mínima da NAC com redução de 90% (CIM90) foi de 25 mg/mL para ambas as cepas. Apesar de não ter sido encontrado nenhum valor de concentração fungicida mínima (CFM), a NAC reduziu (p≤ 0,001) a viabilidade fúngica em 1,81 a 4,06 log10 em ambas as cepas avaliadas. Na curva de inativação, apenas as concentrações ≥ CIM reduziram o crescimento fúngico durante 24 h, essa ação fungistática foi mais evidente entre 8-10h. Concentrações < CIM aumentaram o crescimento fúngico. Em biofilmes em formação, concentrações > CIM (100 e 50 mg/mL) inibiram a viabilidade (redução de 1,41 a 2,77 log10) e a biomassa (redução de 39 a 88%), e para CaS a NAC 25 e 12,5 mg/mL também reduziu biomassa em 77 e 34%, respectivamente. Esse efeito inibitório também foi observado em diferentes fases da formação do biofilme (24, 12 e 6 h). Já em biofilmes maduros, apenas a NAC 100 mg/mL reduziu a viabilidade (1,12 a 2,30 log10) em ambas as cepas, e em CaR 50 e 25 mg/mL de NAC reduziram 1,26 e 0,64 log10, respectivamente. Na biomassa, a NAC 100 mg/mL reduziu 69-72% para ambas as cepas, e em CaR a NAC 50 e 25 mg/mL também reduziu em 64 e 48%, respectivamente. NAC 12,5 mg/mL também aumentou (p< 0,001) a viabilidade de CaS do biofilme maduro e em formação. Na análise dos componenetes da matriz dos bofilmes, foi observada uma tendência da NAC 100 mg/mL (biofilmes maduros) e 50 mg/mL (biofilmes em formação) em diminuir o peso seco do precipitado, proteínas do sobrenadante, WSP, ASP e eDNA. Assim, a NAC apresentou efeito fungistático contra as CaS e CaR, com um efeito concentração-dependente. O efeito antibiofilme da NAC foi decorrente de sua ação fungistática, uma vez que somente as concentrações que inibiram a viabilidade fúngica reduziram a biomassa. Houve uma tendência da NAC em diminuir os componentes solúveis da matriz. Este foi um estudo experimental in vitro inicial, que visa futuramente a aplicabilidade clínica da NAC como um coadjuvante no controle de biofilme de Ca sobre a superfície de próteses dentárias.