Localização sub-celular de proteínas marcadas com GFP em Xanthomonas axonopodis pv. citri por microscopia de fluorescência

• Autor(a) principal: Martins, Paula Maria Moreira [UNESP]
• Data de Publicação: 2009
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/87749
• topic: Microorganismos; Microbiologia; Cancro citrico; Proteínas hipotéticas; Subcellular localization; Hypothetical protein

O cancro cítrico é uma doença causada pela bactéria Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac), e que afeta plantas de citros por todo o mundo. O genoma de Xac foi completamente seqüenciado, o que revelou grandes quantidades de ORFs (~30%) codificando para produtos com função desconhecida (proteínas hipotéticas). Baseando-se no princípio de que muitos eventos bioquímicos acontecem em sítios específicos no interior celular, a localização de proteínas em fusão com GFP tem sido amplamente utilizada para a obtenção de informações valiosas a respeito de suas funções. Para iniciarmos estudos de localização de proteínas hipotéticas em Xac, construímos um vetor integrativo capaz de expressá-las em fusão com o polipeptídio GFP, pPM2a. O vetor de expressão para Xac carrega um cassete promotor/repressor de xilose (xylR/pxyl), o gene gfp, um RBS sintético e um fragmento do gene de α-amilase de Xac, para direcionar a integração do sistema de expressão no lócus amy do cromossomo bacteriano. Mostramos aqui a integração estável do vetor no lócus amy de Xac. Além disso, mutantes de Xac expressando o polipeptídio GFP não apresentam nenhuma alteração em seu fenótipo de patogenicidade para o hospedeiro (laranja doce). Mutantes de Xac expressando versões marcadas com GFP para as proteínas ParB e ZapA, ambas codificadas por Xac, foram utilizadas para a padronização dos estudos de localização subcelular. GFP-ZapAXac apresentou um padrão de localização análogo ao de seu ortólogo presente em Bacillus subtilis: uma estrutura semelhante a uma barra, posicionada no meio do bacilo, onde o septo se desenvolve, orientado perpendicularmente com relação ao eixo longitudinal da célula. Este é o primeiro relato de um estudo de localização realizado em Xac. Ao contrário de GFP-ZapAXac, ParBXac-GFP não mostrou nenhum padrão de localização, apesar de a fusão...