Clonagem e expressão de fragmentos funcionais(scFv) de anticorpo contra o Parvovírus canino-2 com a técnica da Phage display

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Batista, Thiago Neves [UNESP]
Data de Publicação: 2008
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/103780
Resumo: A parvovirose canina, uma das principais doenças infecto-contagiosas que acomete cães, é causada pelo Parvovírus canino-2 (CPV-2). Desde sua ' escrição importantes mutações ocorreram originando três tipos: CPV-2a e 2b, comumente detectados no Brasil, e o CPV-2c. Essas alterações antígênicas caracterizam o CPV como um dos principais modelos de evolução viral, sendo etectáveis com painéis de anticorpos monoclonais em técnicas simples como hemaglutinação e neutralização in vitro. A tecnologia de apresentação de :J oteínas em bacteriófagos (Phage display) tem diversas aplicações, dentre elas a apresentação de fragmentos recombinantes de anticorpos funcionais scFv), que podem ser produzidos em grande quantidade. Este trabalho utilizou Phage Display para expressar fragmentos scFv contra o CPV-2 , com uma etodologia descrita (Krebber, 1997). Após o cultivo e purificação do vírus, camundongos da linhagem High seleção IV A foram imunizados com o CPV-2 , sendo em seguida extraído RNA total do baço. A amplificação das cadeias leve e pesada, e sua ligação por SOE-PCR, permitiu a clonagem do scFv no fagomídeo pAK 100. Após a transformação da E.coli XL-1 blue, bacteriófagos 13 foram expressos apresentando o fragmento scFv. Três processos de seleção foram realizados, e após '0 Phage-ELlSA, um grupo de fagos foi selecionado. A partir deste um screening foi realizado por PCR sendo dois lones detectados. Após nova expressão de ambos uma nova reação de Phage-ELlSA foi realizada e demonstrou a especificidade destes clones com o CPV-2. Até o presente momento esta é a primeira descrição da técnica de Phage display apresentando fragmentos de anticorpo anti-CPV-2.
id UNSP_7ea7ccf2db30ea3886196d8f949191d5
oai_identifier_str oai:repositorio.unesp.br:11449/103780
network_acronym_str UNSP
network_name_str Repositório Institucional da UNESP
repository_id_str 2946
spelling Clonagem e expressão de fragmentos funcionais(scFv) de anticorpo contra o Parvovírus canino-2 com a técnica da Phage displayCão - DoençasVirologia animalBiologia molecularAntibody fragmentsCanine parvovirus 2BacteriophagesA parvovirose canina, uma das principais doenças infecto-contagiosas que acomete cães, é causada pelo Parvovírus canino-2 (CPV-2). Desde sua ' escrição importantes mutações ocorreram originando três tipos: CPV-2a e 2b, comumente detectados no Brasil, e o CPV-2c. Essas alterações antígênicas caracterizam o CPV como um dos principais modelos de evolução viral, sendo etectáveis com painéis de anticorpos monoclonais em técnicas simples como hemaglutinação e neutralização in vitro. A tecnologia de apresentação de :J oteínas em bacteriófagos (Phage display) tem diversas aplicações, dentre elas a apresentação de fragmentos recombinantes de anticorpos funcionais scFv), que podem ser produzidos em grande quantidade. Este trabalho utilizou Phage Display para expressar fragmentos scFv contra o CPV-2 , com uma etodologia descrita (Krebber, 1997). Após o cultivo e purificação do vírus, camundongos da linhagem High seleção IV A foram imunizados com o CPV-2 , sendo em seguida extraído RNA total do baço. A amplificação das cadeias leve e pesada, e sua ligação por SOE-PCR, permitiu a clonagem do scFv no fagomídeo pAK 100. Após a transformação da E.coli XL-1 blue, bacteriófagos 13 foram expressos apresentando o fragmento scFv. Três processos de seleção foram realizados, e após '0 Phage-ELlSA, um grupo de fagos foi selecionado. A partir deste um screening foi realizado por PCR sendo dois lones detectados. Após nova expressão de ambos uma nova reação de Phage-ELlSA foi realizada e demonstrou a especificidade destes clones com o CPV-2. Até o presente momento esta é a primeira descrição da técnica de Phage display apresentando fragmentos de anticorpo anti-CPV-2.Canine parvoviral disease, one of the most common infectious disorders of dogs, is caused by canine parvovirus (CPV-2). Several mutations have accurred since it was described in the late 1970s, originating three antigenic pes: CPV-2a and 2b, most commonly found in Brazil, and the CPV-2c. These tigenic differences characterize CPV-2 as an important model of virus evolution, and could be detected by monoclonal antibody panel in hemmaglutination and in vitro neutralization. Phage display has many a plications and have been used displaying functional antibodies fragments scFv) , which can be produced in large amount. The technology described hereUniversidade Estadual Paulista (UNESP)Universidade Estadual Paulista (Unesp)Araújo Junior, João Pessoa [UNESP]Ribolla, Paulo Eduardo Martins [UNESP]Universidade Estadual Paulista (Unesp)Batista, Thiago Neves [UNESP]2014-06-11T19:32:51Z2014-06-11T19:32:51Z2008-02-02info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesis60 f.application/pdfBATISTA, Thiago Neves. Clonagem e expressão de fragmentos funcionais(scFv) de anticorpo contra o Parvovírus canino-2 com a técnica da Phage display. 2008. 60 f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia de Botucatu, 2008.http://hdl.handle.net/11449/103780000551827batista_tn_dr_botfmvz_prot.pdf33004064022P335771497484568800000-0001-8735-6090Alephreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESPporinfo:eu-repo/semantics/openAccess2024-09-09T17:48:38Zoai:repositorio.unesp.br:11449/103780Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.unesp.br/oai/requestrepositoriounesp@unesp.bropendoar:29462024-09-09T17:48:38Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)false
dc.title.none.fl_str_mv Clonagem e expressão de fragmentos funcionais(scFv) de anticorpo contra o Parvovírus canino-2 com a técnica da Phage display
title Clonagem e expressão de fragmentos funcionais(scFv) de anticorpo contra o Parvovírus canino-2 com a técnica da Phage display
spellingShingle Clonagem e expressão de fragmentos funcionais(scFv) de anticorpo contra o Parvovírus canino-2 com a técnica da Phage display
Batista, Thiago Neves [UNESP]
Cão - Doenças
Virologia animal
Biologia molecular
Antibody fragments
Canine parvovirus 2
Bacteriophages
title_short Clonagem e expressão de fragmentos funcionais(scFv) de anticorpo contra o Parvovírus canino-2 com a técnica da Phage display
title_full Clonagem e expressão de fragmentos funcionais(scFv) de anticorpo contra o Parvovírus canino-2 com a técnica da Phage display
title_fullStr Clonagem e expressão de fragmentos funcionais(scFv) de anticorpo contra o Parvovírus canino-2 com a técnica da Phage display
title_full_unstemmed Clonagem e expressão de fragmentos funcionais(scFv) de anticorpo contra o Parvovírus canino-2 com a técnica da Phage display
title_sort Clonagem e expressão de fragmentos funcionais(scFv) de anticorpo contra o Parvovírus canino-2 com a técnica da Phage display
author Batista, Thiago Neves [UNESP]
author_facet Batista, Thiago Neves [UNESP]
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Araújo Junior, João Pessoa [UNESP]
Ribolla, Paulo Eduardo Martins [UNESP]
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.contributor.author.fl_str_mv Batista, Thiago Neves [UNESP]
dc.subject.por.fl_str_mv Cão - Doenças
Virologia animal
Biologia molecular
Antibody fragments
Canine parvovirus 2
Bacteriophages
topic Cão - Doenças
Virologia animal
Biologia molecular
Antibody fragments
Canine parvovirus 2
Bacteriophages
description A parvovirose canina, uma das principais doenças infecto-contagiosas que acomete cães, é causada pelo Parvovírus canino-2 (CPV-2). Desde sua ' escrição importantes mutações ocorreram originando três tipos: CPV-2a e 2b, comumente detectados no Brasil, e o CPV-2c. Essas alterações antígênicas caracterizam o CPV como um dos principais modelos de evolução viral, sendo etectáveis com painéis de anticorpos monoclonais em técnicas simples como hemaglutinação e neutralização in vitro. A tecnologia de apresentação de :J oteínas em bacteriófagos (Phage display) tem diversas aplicações, dentre elas a apresentação de fragmentos recombinantes de anticorpos funcionais scFv), que podem ser produzidos em grande quantidade. Este trabalho utilizou Phage Display para expressar fragmentos scFv contra o CPV-2 , com uma etodologia descrita (Krebber, 1997). Após o cultivo e purificação do vírus, camundongos da linhagem High seleção IV A foram imunizados com o CPV-2 , sendo em seguida extraído RNA total do baço. A amplificação das cadeias leve e pesada, e sua ligação por SOE-PCR, permitiu a clonagem do scFv no fagomídeo pAK 100. Após a transformação da E.coli XL-1 blue, bacteriófagos 13 foram expressos apresentando o fragmento scFv. Três processos de seleção foram realizados, e após '0 Phage-ELlSA, um grupo de fagos foi selecionado. A partir deste um screening foi realizado por PCR sendo dois lones detectados. Após nova expressão de ambos uma nova reação de Phage-ELlSA foi realizada e demonstrou a especificidade destes clones com o CPV-2. Até o presente momento esta é a primeira descrição da técnica de Phage display apresentando fragmentos de anticorpo anti-CPV-2.
publishDate 2008
dc.date.none.fl_str_mv 2008-02-02
2014-06-11T19:32:51Z
2014-06-11T19:32:51Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv BATISTA, Thiago Neves. Clonagem e expressão de fragmentos funcionais(scFv) de anticorpo contra o Parvovírus canino-2 com a técnica da Phage display. 2008. 60 f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia de Botucatu, 2008.
http://hdl.handle.net/11449/103780
000551827
batista_tn_dr_botfmvz_prot.pdf
33004064022P3
3577149748456880
0000-0001-8735-6090
identifier_str_mv BATISTA, Thiago Neves. Clonagem e expressão de fragmentos funcionais(scFv) de anticorpo contra o Parvovírus canino-2 com a técnica da Phage display. 2008. 60 f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia de Botucatu, 2008.
000551827
batista_tn_dr_botfmvz_prot.pdf
33004064022P3
3577149748456880
0000-0001-8735-6090
url http://hdl.handle.net/11449/103780
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 60 f.
application/pdf
dc.publisher.none.fl_str_mv Universidade Estadual Paulista (Unesp)
publisher.none.fl_str_mv Universidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.source.none.fl_str_mv Aleph
reponame:Repositório Institucional da UNESP
instname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)
instacron:UNESP
instname_str Universidade Estadual Paulista (UNESP)
instacron_str UNESP
institution UNESP
reponame_str Repositório Institucional da UNESP
collection Repositório Institucional da UNESP
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)
repository.mail.fl_str_mv repositoriounesp@unesp.br
_version_ 1813546560863076352

Registros relacionados