Sexagem e acondicionamento de embriões equinos pré-implantacionais produzidos in vivo

• Autor(a) principal: Camargo, Giovana Siqueira
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/237429
• topic: PCR; Colapso embrionário; Blastocele; Armazenamento; Transporte; Embryonic collapse; Blastocoel; Storage; Transport

A sexagem de embriões equinos através do fluido da blastocele (FB), é uma biotecnologia recente, e associada ao transporte de embriões têm boas perspectivas no campo. Objetivos:(1) testar a técnica de sexagem por PCR do FB de embriões pré-implantacionais produzidos in vivo coletado a partir do colapso embrionário com agulha hipodérmica; (2) avaliar a capacidade de re-expansão embrionária após acondicionamento destes embriões produzidos in vivo colapsados; (3) avaliar a qualidade e tamanho de embriões produzidos in vivo, colapsados e íntegros, após simulação de transporte sob acondicionamentos em temperatura ambiente (25ºC) e refrigeração à 5ºC por 24 horas. As condições experimentais visaram mimetizar condições aplicáveis à rotina de campo. Métodos: I -Foram coletados 42 embriões e distribuídos aleatoriamente entre quatro grupos experimentais: CTA (n=11 embriões colapsados acondicionados em temperatura ambiente), CTR (n=11 embriões colapsados acondicionados sob refrigeração), NCTA (n=10 embriões não colapsados acondicionados em temperatura ambiente) e NCTR (n=10 embriões não colapsados acondicionados sob refrigeração), e todos armazenados por um período de 24 horas. II -As amostras de FB (n=19) foram coletadas após o colapso dos embriões com agulha hipodérmica 26G, dos grupos CTA e CTR, e foram submetidas as duas PCR sequenciadas com os primers específicos TSPY e AMEL para a identificação dos sexos. III - Apenas três embriões (n=1 CTA, n=1 CTR, e n=1 imediatamente após o colapso) foram submetidos a microscopia por fluorescência com marcador DAPI e microscopia de interferência de contraste (DIC) para uma análise descritiva da lesão. Resultados: (I)Todos os embriões submetidos ao colapso sofreram redução no tamanho após as 24h, mas os acondicionados em temperatura ambiente (25ºC) apresentaram uma melhor qualidade morfológica após as 24h. Dos embriões íntegros, apenas o grupo NCTA obtiveram uma taxa de crescimento positiva (+25,95%) e mantiveram sua qualidade de grau 1 excelente em M24, enquanto que os refrigerados a 5ºC apresentou uma queda na classificação com 20% de embriões degenerados após as 24h. (II) A técnica de sexagem por FB mostrou-se eficiente com o diagnóstico de 57,90% de machos, através da amplificação de bandas especificas para TSPY com as duas PCR sequenciadas. (III) A lesão embrionária causada pelo colapso manual com a agulha hipodérmica 26G foi visualizada por microscopia de fluorescência. É possível realizar a sexagem embriões equinos através de amostras do FB por PCR. Conclusões: Os embriões colapsados com a agulha hipodérmica 26G são capazes de se recuperar parcialmente das lesões, principalmente quando acondicionados em meio de manutenção em temperatura ambiente por até 24h. A temperatura ambiente (25ºC) demonstrou ser a melhor temperatura de acondicionamento para o transporte de embriões equinos íntegros e colapsados por até 24h, dentro das condições apresentadas, por atuar diretamente otimizando a qualidade morfológica durante as 24hrs. Estudos complementares são necessários para comprovar a viabilidade das células embrionárias pós-colapso como teste in vitro, e a aplicabilidade de inovulação desses embriões para obtenção de suas possíveis taxas de prenhez e perdas embrionárias como teste in vivo.