Estudo e otimização da produção da dextranasacarase e caracterização da dextrana produzida por Leuconostoc mesenteroides FT045B

• Autor(a) principal: Vettori, Mary Helen Palmuti Braga [UNESP]
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/95015
• topic: Enzimas; Melaço; Delineamento composto central; Água de maceração de milho; Enzymes

Um estudo comparativo de onze métodos para determinação da atividade da dextranasacarase e de enzimas relacionadas foi realizado. Atualmente existem dois métodos usualmente empregados na determinação da atividade da dextranasacarase. Um método relativamente difundido para a reação da enzima com a sacarose consiste na medição dos valores redutores da D-frutose pelo reagente 3,5-dinitrosalicilato (DNS). Outro método é a reação da enzima com 14Csacarose, pela adição de uma alíquota da reação em papel de filtro Whatman 3MM, que posteriormente é lavado com metanol para a remoção da 14C-D-frutose e da 14C-sacarose não reagida, seguido da quantificação de 14C-dextrana por contador de cintilação líquida (CCL). Foi mostrado, pelo estudo realizado, que ambos os métodos geram dados errados. O método por quantificação do valor redutor proporciona resultados extremamente altos devido à oxidação tanto da D-frutose quanto da dextrana, e o método do 14C-papel gera resultados significativamente baixos devido à remoção de parte da 14C-dextrana do papel, pela lavagem em metanol. Neste trabalho, foram testados onze métodos, dentre os quais, dois apresentaram resultados idênticos, sendo considerados métodos confiáveis de medição da atividade da dextranasacarase. Este trabalho também reporta a caracterização físico-química de uma nova dextrana produzida por Leuconostoc mesenteroides FT045B. A estrutura química do polímero foi caracterizada por Espectroscopia de Infravermelho com Transformada de Fourier e por Espectroscopia de 1H Ressonância Magnética Nuclear. A dextrana produzida foi hidrolisada por endodextranase e seus produtos da reação do aceptor com maltose foram analisados por cromatografia em camada delgada e comparados com a dextrana comercial B512F obtida da Sigma Company. A massa molecular media e o grau de polimerização da dextrana produzida...