Efeito da utilização de antioxidante no diluidor para a criopreservação de sêmen bovino avaliado através de testes complementares, inseminação artificial e fecundação in vitro

• Autor(a) principal: Borges, Juliana Corrêa [UNESP]
• Data de Publicação: 2008
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/105953
• topic: Antioxidant; Blastocysts; Bull; Extenders; Semen; Bovino; Reprodução animal; Criopreservação; Sêmen; Touro; Antioxidante; Blastocistos; Diluidores

Efeitos deletérios dos radicais livres causam a lipoperoxidação da membrana plasmática dos gametas feminino e masculino e dos embriões cultivados in vitro, sendo responsável por perda da produção in vitro de embriões e redução da fertilidade in vivo. O estudo foi realizado com objetivo de investigar o efeito protetor do diluidor de sêmen contendo antioxidante submetido à criopreservação e avaliado por testes complementares (teste de termo resistência, hiposmótico e fluorescência), pela inseminação artificial e fertilização in vitro. Ejaculados de cinco touros foram agrupados nos seguintes tratamentos: 1 – Diluidor Tris – gema (controle – Dil C); 2 – Diluidor Tris –gema + Trolox 200mM (antioxidante-Dil T). Amostras com os diluidores com concentração final de 25 x 106 espermatozóides/ palheta foram envasadas em palhetas de 0,25 mL. Em uma fazenda localizada no Mato Grosso do Sul – MS, foram inseminadas 300 novilhas Nelore, e para cada touro realizou-se 60 inseminações artificiais (palhetas descongeladas em 35°C por 20 seg). Oócitos com citoplasma homogêneo e cumulus compacto de ovário de vacas de abatedouro foram selecionados e maturados em grupos de 25 por gota em 100μl de meio TCM 199 com SFB, FSH, hCG e estradiol, piruvato de sódio e amicacina, por 24 horas, sob óleo mineral, e foram cultivados com 5% CO2 e 95% umidade em ar, a 38,5ºC. Depois da maturação, os oócitos foram colocados em gotas com TALP contendo BSA, PHE e 10μg/ml de heparina com 1x 106 espermatozóides móveis por ml. Quatro palhetas (duas – DC e duas – DT) do mesmo touro e ejaculado foram descongeladas e cada palheta foi processada por um método de separação espermática para recuperação do sobrenadante: método de lavagem (duas centrifugações de 36xg por 5 min em 2ml de TL-sêmen) e gradiente de Percoll (45 e 90%, submetido a centrifugação a 500xg por 30 min)...