Aspectos comparativos das luciferases pH-insensitivas de Pyrearinus termitilluminans (Coleoptera: Elateridae) e Phrixotrix spp (Coleoptera: Phengodidae): expressão, purificação e propriedades do sítio ativo

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Silva Neto, Antonio Joaquim da [UNESP]
Data de Publicação: 2009
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/100566
Resumo: Neste trabalho foi feita a expressão e purificação das luciferases recombinantes do elaterídeo Pyrearinus termitilluminans e dos fengodídeos Phrixotrix hirtus e Phrixotrix viviani, e a determinação e comparação de suas propriedades físico-químicas. Estimamos os Kms para luciferina e ATP, as constantes catalíticas, pH ótimo e outros dados cinéticos nas três luciferases. Através do uso de sondas fluorescentes, fizemos uma inspeção da polaridade dos sítios de ligação da luciferina. Além disso, foi feita a modelagem molecular para complementar os estudos experimentais e identificar os resíduos do sítio-ativo que afetam a polaridade e os espectros de bioluminescência nestas luciferases. Os dados sugerem que a luciferase de Pyrearinus termitilluminans tem o sítio ativo mais hidrofóbico entre as luciferases estudadas e a luciferase de Phrixotrix hirtus o mais polar. Estes dados suportam a importância da polaridade e polarizabilidade orientada na determinação dos espectros de bioluminescência. Além disto, os resultados de termoestabilidade e cinética de luminescência da luciferase de Pyrearinus termitilluminans sugerem que esta enzima seja particularmente apropriada para aplicações de bioimageamento.
id UNSP_9383e1fdb1423d29df568d82ef812535
oai_identifier_str oai:repositorio.unesp.br:11449/100566
network_acronym_str UNSP
network_name_str Repositório Institucional da UNESP
repository_id_str 2946
spelling Aspectos comparativos das luciferases pH-insensitivas de Pyrearinus termitilluminans (Coleoptera: Elateridae) e Phrixotrix spp (Coleoptera: Phengodidae): expressão, purificação e propriedades do sítio ativoBioquímicaBioluminescenciaPolarizabilidade orientadaBioluminescenceBiochemistryNeste trabalho foi feita a expressão e purificação das luciferases recombinantes do elaterídeo Pyrearinus termitilluminans e dos fengodídeos Phrixotrix hirtus e Phrixotrix viviani, e a determinação e comparação de suas propriedades físico-químicas. Estimamos os Kms para luciferina e ATP, as constantes catalíticas, pH ótimo e outros dados cinéticos nas três luciferases. Através do uso de sondas fluorescentes, fizemos uma inspeção da polaridade dos sítios de ligação da luciferina. Além disso, foi feita a modelagem molecular para complementar os estudos experimentais e identificar os resíduos do sítio-ativo que afetam a polaridade e os espectros de bioluminescência nestas luciferases. Os dados sugerem que a luciferase de Pyrearinus termitilluminans tem o sítio ativo mais hidrofóbico entre as luciferases estudadas e a luciferase de Phrixotrix hirtus o mais polar. Estes dados suportam a importância da polaridade e polarizabilidade orientada na determinação dos espectros de bioluminescência. Além disto, os resultados de termoestabilidade e cinética de luminescência da luciferase de Pyrearinus termitilluminans sugerem que esta enzima seja particularmente apropriada para aplicações de bioimageamento.In this work, purification and comparative physical-chemical characterization of the recombinant luciferases from the elaterid Pyrearinus termitilluminans and from the phengodids Phrixotrix hirtus and Phrixotrix viviani was performed. The Kms for luciferin and ATP, the Kcat, optimum pH and other kinetics data were estimated in the three luciferases. Through fluorescent probes, we assessed the active-site polarity. Furthermore, molecular modeling was performed in order to support the experimental studies and suggest putative active site residues that could be responsible for changes of polarity. These data suggest that the luciferin binding site is more hydrophobic for Pyrearinus luciferase than in the other luciferases studied and support the polarity hypothesis as a mechanism for modulation of bioluminescence colors.Universidade Estadual Paulista (Unesp)Viviani, Vadim [UNESP]Universidade Estadual Paulista (Unesp)Silva Neto, Antonio Joaquim da [UNESP]2014-06-11T19:30:56Z2014-06-11T19:30:56Z2009-03-16info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesis78 f. : il., gráfs., tabs.application/pdfSILVA NETO, Antonio Joaquim da. Aspectos comparativos das luciferases pH-insensitivas de Pyrearinus termitilluminans (Coleoptera: Elateridae) e Phrixotrix spp (Coleoptera: Phengodidae): expressão, purificação e propriedades do sítio ativo. 2009. 78 f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual Paulista, Instituto de Biociências de Rio Claro, 2009.http://hdl.handle.net/11449/100566000595963silvaneto_aj_dr_rcla.pdf33004137046P4Alephreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESPporinfo:eu-repo/semantics/openAccess2023-11-21T06:13:23Zoai:repositorio.unesp.br:11449/100566Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.unesp.br/oai/requestopendoar:29462024-08-05T18:20:40.086733Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)false
dc.title.none.fl_str_mv Aspectos comparativos das luciferases pH-insensitivas de Pyrearinus termitilluminans (Coleoptera: Elateridae) e Phrixotrix spp (Coleoptera: Phengodidae): expressão, purificação e propriedades do sítio ativo
title Aspectos comparativos das luciferases pH-insensitivas de Pyrearinus termitilluminans (Coleoptera: Elateridae) e Phrixotrix spp (Coleoptera: Phengodidae): expressão, purificação e propriedades do sítio ativo
spellingShingle Aspectos comparativos das luciferases pH-insensitivas de Pyrearinus termitilluminans (Coleoptera: Elateridae) e Phrixotrix spp (Coleoptera: Phengodidae): expressão, purificação e propriedades do sítio ativo
Silva Neto, Antonio Joaquim da [UNESP]
Bioquímica
Bioluminescencia
Polarizabilidade orientada
Bioluminescence
Biochemistry
title_short Aspectos comparativos das luciferases pH-insensitivas de Pyrearinus termitilluminans (Coleoptera: Elateridae) e Phrixotrix spp (Coleoptera: Phengodidae): expressão, purificação e propriedades do sítio ativo
title_full Aspectos comparativos das luciferases pH-insensitivas de Pyrearinus termitilluminans (Coleoptera: Elateridae) e Phrixotrix spp (Coleoptera: Phengodidae): expressão, purificação e propriedades do sítio ativo
title_fullStr Aspectos comparativos das luciferases pH-insensitivas de Pyrearinus termitilluminans (Coleoptera: Elateridae) e Phrixotrix spp (Coleoptera: Phengodidae): expressão, purificação e propriedades do sítio ativo
title_full_unstemmed Aspectos comparativos das luciferases pH-insensitivas de Pyrearinus termitilluminans (Coleoptera: Elateridae) e Phrixotrix spp (Coleoptera: Phengodidae): expressão, purificação e propriedades do sítio ativo
title_sort Aspectos comparativos das luciferases pH-insensitivas de Pyrearinus termitilluminans (Coleoptera: Elateridae) e Phrixotrix spp (Coleoptera: Phengodidae): expressão, purificação e propriedades do sítio ativo
author Silva Neto, Antonio Joaquim da [UNESP]
author_facet Silva Neto, Antonio Joaquim da [UNESP]
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Viviani, Vadim [UNESP]
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.contributor.author.fl_str_mv Silva Neto, Antonio Joaquim da [UNESP]
dc.subject.por.fl_str_mv Bioquímica
Bioluminescencia
Polarizabilidade orientada
Bioluminescence
Biochemistry
topic Bioquímica
Bioluminescencia
Polarizabilidade orientada
Bioluminescence
Biochemistry
description Neste trabalho foi feita a expressão e purificação das luciferases recombinantes do elaterídeo Pyrearinus termitilluminans e dos fengodídeos Phrixotrix hirtus e Phrixotrix viviani, e a determinação e comparação de suas propriedades físico-químicas. Estimamos os Kms para luciferina e ATP, as constantes catalíticas, pH ótimo e outros dados cinéticos nas três luciferases. Através do uso de sondas fluorescentes, fizemos uma inspeção da polaridade dos sítios de ligação da luciferina. Além disso, foi feita a modelagem molecular para complementar os estudos experimentais e identificar os resíduos do sítio-ativo que afetam a polaridade e os espectros de bioluminescência nestas luciferases. Os dados sugerem que a luciferase de Pyrearinus termitilluminans tem o sítio ativo mais hidrofóbico entre as luciferases estudadas e a luciferase de Phrixotrix hirtus o mais polar. Estes dados suportam a importância da polaridade e polarizabilidade orientada na determinação dos espectros de bioluminescência. Além disto, os resultados de termoestabilidade e cinética de luminescência da luciferase de Pyrearinus termitilluminans sugerem que esta enzima seja particularmente apropriada para aplicações de bioimageamento.
publishDate 2009
dc.date.none.fl_str_mv 2009-03-16
2014-06-11T19:30:56Z
2014-06-11T19:30:56Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv SILVA NETO, Antonio Joaquim da. Aspectos comparativos das luciferases pH-insensitivas de Pyrearinus termitilluminans (Coleoptera: Elateridae) e Phrixotrix spp (Coleoptera: Phengodidae): expressão, purificação e propriedades do sítio ativo. 2009. 78 f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual Paulista, Instituto de Biociências de Rio Claro, 2009.
http://hdl.handle.net/11449/100566
000595963
silvaneto_aj_dr_rcla.pdf
33004137046P4
identifier_str_mv SILVA NETO, Antonio Joaquim da. Aspectos comparativos das luciferases pH-insensitivas de Pyrearinus termitilluminans (Coleoptera: Elateridae) e Phrixotrix spp (Coleoptera: Phengodidae): expressão, purificação e propriedades do sítio ativo. 2009. 78 f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual Paulista, Instituto de Biociências de Rio Claro, 2009.
000595963
silvaneto_aj_dr_rcla.pdf
33004137046P4
url http://hdl.handle.net/11449/100566
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 78 f. : il., gráfs., tabs.
application/pdf
dc.publisher.none.fl_str_mv Universidade Estadual Paulista (Unesp)
publisher.none.fl_str_mv Universidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.source.none.fl_str_mv Aleph
reponame:Repositório Institucional da UNESP
instname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)
instacron:UNESP
instname_str Universidade Estadual Paulista (UNESP)
instacron_str UNESP
institution UNESP
reponame_str Repositório Institucional da UNESP
collection Repositório Institucional da UNESP
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1808128922636779520

Registros relacionados