Secretoma de meios condicionados por células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo em caninos e felinos produzidos em diferentes ambientes de cultivo

• Autor(a) principal: Lara, Maria Laura Lara
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/183141
• topic: Células mesenquimais estromais; Matriz extracelular; Secretoma; Proteômica; MSCs; Secretome; conditioned medium; proteomic; extracellular matrix

As células-tronco mesenquimais (MSCs) exercem seus efeitos terapêuticos predominantemente pela sua atividade parácrina. Como o secretoma desempenha um papel direto nas atividades biológicas das MSCs, a análise de seus componentes proteicos é um passo fundamental para identificar os principais responsáveis no controle e regulação dos muitos processos biológicos desenvolvidos por essas células. O secretoma de MSCs pode ser modificado e melhorado de forma in vitro para estimular efeitos celulares específicos desejados para aplicações terapêuticas, e uma maneira de modificá-lo é por meio de modificações nas condições de cultura. No presente estudo, objetivou-se descrever o secretoma de células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo (AD-MSCs) de gatos e cães submetidos a diferentes condições de cultivo, identificamos e comparamos os efeitos exercidos por diferentes modificações de cultivo. Para a produção de meio condicionado, as células foram descongeladas e cultivadas com meio DMEM/F12 com 20% de FBS, suplementado com antibióticos e antimicóticos em uma incubadora com umidade controlada a 37,5 °C, e 5% de CO2. Após atingir pelo menos 70% de confluência, as garrafas foram lavadas três vezes com solução salina balanceada Hanks (HBSS) e foram cultivadas em quatro condicionamentos distintos. O meio condicionado foi colhido após 4 dias, centrifugado por 10 min/300 g, filtrado em um filtro 0,22 μm e congelado a -80 °C. Foram realizadas a extração e concentração proteica de todas as amostras e depleção de albumina das amostras cultivadas em presença de FBS. A digestão em solução foi realizada para preparar as amostras para a análise por espectrometria de massa. Como resultado, os perfis proteômicos produzidos nas condições de cultura mais estressantes, tiveram uma maior expressão proteica, além de conter a maioria das proteínas determinadas como relevantes. Esse grupo, condicionado pela ausência de FBS e hipóxia 5% O2, apresentou um perfil proteômico voltado à matriz extracelular (ECM) e à modulação da resposta imune, demonstrando a capacidade das MSCs em modular o ambiente de acordo com as circunstâncias apresentadas e tornando-o mais adequado para a proliferação e função celular. Levando em conta que o uso do secretoma como terapia livre de células abre uma nova possibilidade terapêutica para diferentes doenças, é essencial continuar investigando as diferentes modificações de cultivo que podem ser feitas na produção do meio condicionado para direcionar sua utilização a diferentes alvos terapêuticos e diagnósticos.