Maturação da afinidade de anticorpo responsivo à glicoproteína S de SARS-CoV-2 e rastreamento pela técnica de yeast surface display

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Nascimento, Ieda Gabriela Bernardo do
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/238732
Resumo: A COVID-19 já foi confirmada em mais de 600 milhões de pessoas no mundo, acarretando mais de 6 milhões de óbitos, sendo 680 mil só no Brasil. A falta de uma farmacoterapia específica e o fato de o país ainda não ter criado um programa eficiente de testagem, evidencia a necessidade de desenvolvimento e disponibilidade de testes rápidos, de baixo custo e alta sensibilidade ao SARS-CoV-2. A proposta deste trabalho foi construir e analisar uma biblioteca de mutações aleatórias no fragmento variável da porção pesada (scFv) do anticorpo CC12.1, da linha germinativa IGHV3-53, relatado na literatura como um dos mais específicos e de maior afinidade ao domínio de ligação ao receptor (do inglês, RBD), sendo um potencial candidato para detecção específica do SARS-CoV-2. Uma biblioteca de mutantes aleatórios do anticorpo CC12.1, foi construída a partir da transformação, em linhagem de Saccharomyces cerevisiae EBY100, do inserto produzido por PCR mutagênica da sequência do anticorpo CC12.1, com o vetor pYD4 linearizado. A biblioteca de cerca de 7. 10⁶ clones foi avaliada pela técnica Yeast Surface Display (YSD) pela indução da expressão em galactose e rastreamento da interação dos fragmentos variáveis mutados com o RBD por meio de citometria de fluxo. Entre o primeiro e segundo ciclo de seleção por citometria células incubadas com 420 nM (1,05 µg/mL) de RBD, foi observado um aumento de 1,8x da fração de ligante ao RBD por fragmentos scFvs em relação a biblioteca inicial e de 13x em relação as células expressando a sequência selvagem, demonstrando potencial aplicabilidade no cenário de maturação in vitro da afinidade de anticorpos.
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