Estudo da atividade anti-Paracoccidioides do composto galato de decila: mecanismo de ação e interação fungo-hospedeiro

• Autor(a) principal: Silva, Ana Carolina Alves de Paula e [UNESP]
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/143441
• topic: Galato de decila; Óxido nítrico; Citometria de fluxo; Interação químico genética; N-glicosilação; Decyl gallate; Nitric oxide; Flow cytometry; Chemical-genetic interaction; N-glycosylation

O fungo do gênero Paracoccidioides é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), micose de grande importância no Brasil e América Latina. Há diferentes terapias disponíveis, como os antifúngicos da classe dos poliênicos, azóis e sulfonamidas. O desenvolvimento de novos antifúngicos com eficácia superior é necessário para prevenir recaídas e diminuir os efeitos secundários, o período de tratamento e sequelas. A molécula de ácido gálico com diferentes modificações (galatos de alquila) apresentou atividade antifúngica contra um painel representativo de fungos patogênicos. O galato de decila (G14) foi objeto de estudo deste trabalho, para o qual a interação Paracoccidioides¬-hospedeiro foi relacionada ao mecanismo de ação. Para tanto, o fungo Paracoccidioides lutzii (Pl01) foi desafiado com o G14 para análise das alterações no desenvolvimento de brotamentos e na viabilidade celular pelo ensaio de MTT. Foi avaliada a influência do G14 na taxa de interação de Pl01 com a linhagem de macrófago alveolar murino AMJ2-C11, com as linhagens pulmonares de mamífero A549 e MRC-5, e hemócitos da larva de Galleria mellonella utilizando ensaios por citometria de fluxo. O G14 ainda foi avaliado quanto à taxa de sobrevivência da larva de G. mellonella infectada e a capacidade na modulação da produção de óxido nítrico em macrófago RAW. O estudo do mecanismo de ação foi realizado pelo ensaio de interação químico-genética seguida da interação genética, que consiste na comparação de uma coleção de mutantes da levedura Saccharomyces cereviseae com perfil hipersensível ao G14, a um banco de dados de duplos mutantes para predizer a via afetada. Em P. lutzii (Pl01) e P. brasiliensis (Pb18) foi avaliada a taxa de atividade de enzimas n-glicosiladas (α-(1,3)-glucanase, N-Acetyl-β-D-glucosaminidase e α-amilase) ligadas à formação da parede celular; assim como a expressão relativa dos genes envolvidos através de PCR em tempo real. No ensaio de interação químico-genética, cerca de 50 mutantes foram hipersensíveis e com a análise da interação genética deduziu-se influência sobre a via de glicosilação e/ou na resposta a proteínas não enoveladas. A concentração de 0,5 µg/mL de G14 apresentou redução significativa de 42 % da atividade metabólica e de 38,5 % na formação de novos brotos do Pl01 com 24 horas de contato, indicando forte influência sobre o desenvolvimento da célula fúngica. As enzimas n-glicosiladas testadas para Pl01 e Pb18 apresentaram baixa atividade quando desafiadas com G14, porém os genes referentes a estas enzimas não apresentaram expressão relativa baixa, inferindo a influência nas modificações pós-traducionais destas enzimas. A influência do G14 na atividade funcional destas enzimas resulta na instabilidade da parede celular, a qual é um elemento crucial para a virulência e para a interação Paracoccidioides-célula hospedeira. Assim, foi observada redução na taxa de interação do Pl01 de 1,6 vezes com a linhagem A549, e de 1,2 com a linhagem AMJ2-C11. Além disso, foi observado um aumento no tempo de sobrevivência da larva infectada com Pl01 e tratada, indicando que G14 tem propriedades benéficas ao hospedeiro, o que foi observado com a redução de 20 % na quantificação de óxido nítrico quando macrófagos RAW estimulados por LPS foram desafiados com G14, o que sugere uma atividade antioxidante.