Avaliação antifúngica e de citoqueratinas epiteliais após terapia fotodinâmica mediada por Curcumina nanoparticulada em modelo murino de candidose oral

• Autor(a) principal: Sakima, Vinicius Tatsuyuji [UNESP]
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/166164
• topic: Nanopartículas; Queratinas; Camundongos; Candida albicans; Nanoparticles; Keratins; Mice

Este estudo avaliou os efeitos fotodinâmicos da curcumina (CUR) encapsulada em nanopartículas poliméricas (NP) em um modelo murino com infecção prolongada de candidose bucal. NP de CUR foram sintetizadas utilizando o polímero poli-ácido lático (PLA) e sulfato de dextrana (DEX). Brometo de cetiltrimetil-amônio foi também utilizado para NP catiônicas. Para caracterização dessas formulações, foram determinadas as propriedades fisicoquímicas (tamanho, polidispersão e potencial zeta), testes de eficiência de encapsulamento, espectro de absorção, fotoestabilidade e liberação. Um total de 140 camundongos fêmeas com 6 semanas de vida foram imunossuprimidos e inoculados com uma cepa padrão de Candida albicans (Ca) em uma concentração de 1x107 unidades formadores de colônias por mililitro (UFC/mL) na região dorsal da língua. Para a Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (aPDT), uma das formulações sintetizadas ou CUR livre foi aplicada no dorso lingual dos animais que, após 20 min, foram irradiados com uma fonte de luz LED azul a 37,5 J/cm2 (grupo F+L+). Animais adicionais foram tratados somente com uma das formulações ou CUR livre sem luz (F+L-), Nistatina 1 vez ao dia (NIS1x), Nistatina 4 vezes ao dia (NIS4x) ou não receberam nenhum tratamento (controle). Em todos os grupos, os procedimentos foram realizados em 5 dias consecutivos. Após a última aplicação do tratamento, coletas da língua dos animais foram plaqueadas em meio de cultura específico (CFU/mL). Os animais foram eutanasiados 24 h e 7 dias após o último dia de tratamento, as línguas foram removidas e submetidas às análises histológica e expressão de citoqueratinas (CK) 13 e 14 por ensaio imunohistoquímico (IHQ). Os dados [log10(CFU/mL)] foram analisados por ANOVA/Welch e Games-Howell (α=5%). Após a síntese, as CUR-NP apresentaram propriedades nanomêtricas farmacotécnicas adequadas, com valores médios de tamanho, polidispersão e potencial zeta 225.38; 0.15 e -30.96 mV; 248.12; 0.21 e +35,84 mV respectivamente para as CUR-NP aniônica e catiônica. Foi observada uma eficiência de encapsulamento de 60.84% e 73.81% para as CUR-NP aniônicas e catiônicas. O espectro de absorção das CUR-NP foram semelhantes à CUR livre, com sinais mais elevados de absorbância. CUR livre apresentou uma menor fotodegradação após 20 min de iluminação (43,2 J/cm2). A liberação de CUR das NP aniônicas e catiônicas foi de 52% após 12 horas de estudo. No estudo in vivo, foi observado uma redução significativa de 1,19 log10 para o grupo F+L+ com CUR livre (p<0,001), 1,39 log10 para o grupo NIS4x (p<0,001) e uma maior redução de 2,59 log10 para o grupo NIS1x (p<0,001), quando comparados com o grupo controle. aPDT mediada por CUR-NP aniônica não apresentou efeito antifúngico e a CUR-NP catiônica apresentou efeito antifúngico com e sem luz. Na análise histológica foi observada presença de Ca no epitélio de todos os animais inoculados, porém os animais tratados com nistatina e F+L+ com CUR livre apresentaram menor quantidade de Ca para ambos os períodos de eutanásia. Na análise IHQ foi observada uma intensa marcação para CK 13 e 14 em todos os animais inoculados com exceção dos animais tratados com F+L+ com CUR livre, que apresentaram marcações similares do animal saudável. O encapsulamento da CUR em NP melhorou a solubilidade em água e a estabilidade da CUR, porém a CUR livre mostrou um melhor efeito fotodinâmico do que as CUR-NP.