Identificação e caracterização dos produtos de excreção/secreção de trofozóitos de Giardia duodenalis

• Autor(a) principal: Carvalho, Thaís Batista de [UNESP]
• Data de Publicação: 2008
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/89970
• topic: Giardia; Trofozoítos

O presente estudo foi desenvolvido com o objetivo de identificar e caracterizar os produtos de excreção/ secreção (PE/S) de trofozoítos de Giardia duodenalis de uma cepa axênica isolada no Brasil (BTU-11), tendo por referência a cepa padrão Portland 1 (P-1) isolada nos Estados Unidos. Os PE/S foram obtidos a partir dos sobrenadantes de cultura de trofozoítos mantidos em meio RPMI por 6 horas a 37oC. Os PE/S de cada cepa foram analisados quanto ao perfil eletroforético em géis de poliacrilamida (SDSPAGE) e a atividade proteolítica foi avaliada em géis contendo gelatina e colágeno tipo I a 0,2% e em ensaios empregando hemoglobina a 0,1%. A caracterização das proteases dos PE/S foi realizada em ensaios para avaliar o efeito de inibidores sintéticos de cisteína, serina, metalo e aspartil proteases sobre a degradação de cada substrato testado. A análise dos perfis protéicos revelou padrões simples, porém distintos quanto ao número de bandas de proteínas, visualizando nos PE/S das cepas P-1 e BTU-11, respectivamente, seis e quatro bandas com massas moleculares distribuídas na faixa de 123 a 28 kDa. Quanto à atividade proteolítica, todos os substratos foram degradados por enzimas presentes nos PE/S. A atividade gelatinolítica foi observada na faixa de 77 a 18 kDa, destacando-se seis bandas evidentes de aproximadamente 77, 66, 54, 52, 21 e 18 kDa. A degradação do colágeno foi detectada na faixa de 145 a 18 kDa, sendo que as zonas de proteólise de maior evidência foram observada nas faixas de 145 a 82 kDa e de 56 a 34 kDa, onde destacam-se as bandas de 145, 96, 82 e 34 kDa. A análise dos padrões de hidrólise da hemoglobina demonstrou similaridade entre as cepas e revelou degradação total da cadeia dimérica e lise parcial da cadeia monomérica. A atividade gelatinolítica e...