Estudo e aplicação da sonda fluorescente 4-dimetilamino-β-nitroestireno para caracterização de sítios de ligação em albumina

• Autor(a) principal: Fernandes, Ana Julia Foganholi Carvalho
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/236267
• topic: Albumina sérica bovina; Fluorescência; Solvatocromismo; 4-dimetilamino-β-nitroestireno; Bovine serum albumin; Fluorescence; Solvatochromism; 4-dimethylamino-β-nitrostyrene

As albuminas séricas são proteínas que possuem funções fisiológicas, entre elas, o transporte de fármacos na corrente sanguínea. Essa função é relevante, uma vez que a interação fármaco-BSA pode interferir na biodisponibilidade do fármaco no organismo, afetando a sua ação terapêutica. A albumina de soro bovino (BSA) possui dois principais locais de ligação para fármacos denominados sítio I e sítio II. A determinação do local de ligação de fármacos na albumina pode ser feita pelo uso de sondas fluorescentes. Neste trabalho, tivemos por objetivo estudar a interação do composto fluorescente 4dimetilamino- β -nitroestireno (DANS) com a BSA e avaliar se suas características solvatocrômicas poderiam ser úteis para caracterizar sítios de ligação e a polaridade no microambiente da proteína. Verificamos que ao se ligar a proteína, o DANS teve a sua fluorescência significativamente aumentada, revelando ser uma sonda fluorescente extrínseca para estudo de proteínas. Este fenômeno propiciou a obtenção da constante de associação do complexo (3,1 x 104 mol-1 L) e sua estequiometria BSA:DANS (1:1). A associação foi também estudada por quenching da fluorescência intrínseca da BSA pela complexação com DANS (3,9 x 104 mol-1 L). Através de estudos competitivos com fármacos que se ligam em sítios específicos da BSA, varfarina (sítio I), ibuprofeno (sítio II) e digitoxina (sítio III), verificamos que o DANS não apresenta uma preferência para qualquer um destes sítios. Estudos solvatocrômicos foram realizados e os modelos teóricos de Lippert-Mataga, Bilot-Kawski e McRae foram aplicados para o estabelecer a relação entre as propriedades espectroscópicas do DANS e a polaridade dos solventes. A melhor correlação foi obtida utilizando o modelo de Bilot-Kawski (r2 = 0,7565), no entanto, o modelo de McRae (r2 = 0,5740) foi o mais adequado para a simulação da constante dielétrica no interior da BSA (9,76). Utilizamos também o modelo de multiparamétrico de Kamlet-Taft. A partir deste modelo foi possível encontrar os máximos de absorbância e fluorescência do DANS para prever valores de parâmetros β (índice de basicidade) e π (fator de polarizabilidade) de misturas de solventes.