Caracterização fenotípica e determinação do perfil de sensibilidade antimicrobiana de isolados clínicos de haemophilus parasuis

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Lorenson, Monique Salete
Data de Publicação: 2014
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca de teses e dissertações da Universidade de Passo Fundo (BDTD UPF)
Texto Completo: http://10.0.217.128:8080/jspui/handle/tede/52
Resumo: Haemophilus parasuis (HPS), a member of the Pasteurellaceae, is a small gram-negative bacillum that causes Glässer s disease (GD). This pathology is characterized by poliserositis and high mortality rate of infected animals. Modern approaches to swine industry and high sanitary herd conditions contribute to increase the incidence of GD. Up to now, HPS is classified in 15 serotypes of reference, each one having a distinct antigen profile. There are no data about HPS presences, distribution and prevalence in Brazil. This is true also for Southern Brazil (Rio Grande do Sul and Santa Catarina), where pig industry is an important economical source of income. Against this background, we isolated and analyzed 78 samples of swine lungs with pleuritis and confirmed HPS infection by molecular biology. We evaluated the resistance profile of 35 HPS isolates to 10 antimicrobials using the microdilution technique. We further propose a modified protocol for the indirect hemagglutination (IHA) in order to serotype HPS. Our results demonstrate a high prevalence of HPS positive lung samples (44.4%) coming from piglets with signs suggestive of GD. All lungs from finishing pigs collected at slaughter were negative for HPS, however, 18 of them (54.5%) were PCR positive for Actinobacillus pleuropneumoniae. The susceptibility profile to antimicrobials revealed that all isolates were susceptible ceftiofur, gentamycin and erythromycin. A low degree of resistance was observed with ampicillin (2.8%) and moderate with penicillin (11.4%). Kanamycin and lincomycin were effective at the lowest minimal inhibitory concentration (MIC) used. Similar results were obtained with cefalotin. In contrast, bacitracin and sulfatiazol were effective with the highest MICs used. For IHA we obtained from Wistar rats a high titration of polyclonal antibodies against all 15 serotypes. Treating lamb red blood cells with tannic acid (1:20.000) enables a better adhesion of HPS antigens, resulting in a more accurate technique to serotype clinical isolates. In conclusion, the results presented here, demonstrate a high prevalence of H. parasuis in swine farms of southern Brazil and describe a set of effective antimicrobial drugs for the treatment of DG. Lastly, the HIm exhibited suitable sensitivity and specificity for serotyping of H. parasuis, and its main advantage over classical HI, is the greater capacity for adsorption of H. parasuis antigens
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There are no data about HPS presences, distribution and prevalence in Brazil. This is true also for Southern Brazil (Rio Grande do Sul and Santa Catarina), where pig industry is an important economical source of income. Against this background, we isolated and analyzed 78 samples of swine lungs with pleuritis and confirmed HPS infection by molecular biology. We evaluated the resistance profile of 35 HPS isolates to 10 antimicrobials using the microdilution technique. We further propose a modified protocol for the indirect hemagglutination (IHA) in order to serotype HPS. Our results demonstrate a high prevalence of HPS positive lung samples (44.4%) coming from piglets with signs suggestive of GD. All lungs from finishing pigs collected at slaughter were negative for HPS, however, 18 of them (54.5%) were PCR positive for Actinobacillus pleuropneumoniae. The susceptibility profile to antimicrobials revealed that all isolates were susceptible ceftiofur, gentamycin and erythromycin. 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Lastly, the HIm exhibited suitable sensitivity and specificity for serotyping of H. parasuis, and its main advantage over classical HI, is the greater capacity for adsorption of H. parasuis antigensHaemophilus parasuis (HPS), um pequeno bacilo Gram-negativo, membro da família Pasteurellaceae, é o agente etiológico da Doença de Glässer (DG), uma doença sistêmica caracterizada por intensa poliserosite e alta mortalidade dos animais acometidos. Considerada historicamente como uma doença de ocorrência esporádica, atualmente, devido as novas tendências da suinocultura moderna e com o estabelecimento de rebanhos com alto padrão sanitário, surtos da Doença de Glässer são cada vez mais frequentes, constituindo uma das principais doenças bacterianas emergentes da suinocultura mundial. Até o momento, o H. parasuis pode ser classificado em 15 sorotipos de referência e cada um apresenta perfil antigênico singular. No Brasil, dados referentes a presença, distribuição, prevalência e perfil de suscetibilidade antimicrobiana desse microrganismo são praticamente inexistentes, especialmente na região sul do país (Rio Grande do Sul e Santa Catarina), onde a suinocultura representa uma importante atividade econômica. Motivado por este histórico, realizamos, neste trabalho, o isolamento e confirmação molecular de HPS, a partir de 78 amostras de pulmões com pleurite; avaliamos o perfil de resistência de 35 isolados de HPS frente a 10 antimicrobianos através da técnica de microdiluição em placa e, por último, propomos uma modificação na técnica de Hemaglutinação Indireta para a sorotipificação de HPS (HIm). Nossos resultados demonstraram uma alta prevalência (44.4%) de pulmões positivos para H. parasuis procedentes de leitões com quadro clínico compatível com DG. Todos os pulmões procedentes de suínos de terminação foram negativos para HPS, no entanto, 18 deles (54.5%) foram PCR positivos para Actinobacillus pleuropneumoniae. Com relação ao estudo do perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos, todos os isolados foram sensíveis ao ceftiofur, gentamicina e eritromicina. Foi observado um grau de resistência baixo a ampicilina (2.8%) e moderado para a penicilina (11.4%). Kanamicina e lincomicina foram efetivas nas menores concentrações inibitórias mínimas (MICs) testadas e resultados semelhantes foram observados com relação a cefalotina. De forma contrária, bacitracina e sulfatiazol foram eficazes somente nas maiores MICs testadas. Por último e com relação a HIm, um alto título de anticorpos policlonais contra os 15 sorotipos de referência de HPS foram obtidos em ratas Wistar, inoculadas com os respectivos sorotipos. Quanto ao tratamento das hemácias de carneiro com ácido tânico (1:20.000), este procedimento permitiu uma melhor adsorção dos antígenos superficiais de H. parasuis, resultando numa técnica de HI que permite sorotipificar isolados clínicos com maior sensibilidade e especificidade. Como conclusão, os resultados apresentados nesta dissertação demonstram a circulação de H. parasuis nas granjas de suínos da região sul do Brasil e apresenta um conjunto de drogas antimicrobianas efetivas para o tratamento da DG. Ainda, a HIm proposta neste estudo, apresenta sensibilidade e especificidade para a sorotipificação de HPS, tendo como principal vantagem em relação à HI clássica, maior estabilidade na adesão de antígenos superficiais de H. parasuis. Em conjunto, nossos resultados, inéditos na região sul, podem contribuir para o desenvolvimento de medidas preventivas efetivas para o controle da Doença de GlässerMade available in DSpace on 2018-01-10T17:52:54Z (GMT). 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