Comparação de métodos de extração de DNA a partir de fontes escassas

• Autor(a) principal: Silva, Marjorye Cristina Dias
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações do Mackenzie
• Texto Completo: http://dspace.mackenzie.br/handle/10899/20836
• topic: DNA; extração; amostra escassa; extraction; scarce samples

A fim de avaliar a eficiência, nível de contaminação, toxicidade, qualidade e quantidade da extração de DNA a partir de amostras escassas, como fios de cabelo e raspado bucal, os métodos de extração com fenol-clorofórmio, extração com cloreto de lítio, Kit Wizard® Genomic DNA Purification e método de Lahiri & Nurnberger otimizado por Salazar, foram comparados. A utilização desse tipo de amostra tem aumentado, por não serem invasivas, mais facilmente obtidas e resultarem em boa quantidade e qualidade de ácido desoxirribonucleico. A análise quantitativa e a pureza do material genético extraído foi avaliada com espectrômetro NanoDrop® e fluorimetria (“QuantiFluor® dsDNA System”). Em seguida, a eficiência da extração foi avaliada a partir da reação em cadeia da polimerase (PCR), que amplificou o gene da β-globina humana, posteriormente visualizado através da análise eletroforética em gel de agarose a 2% e transiluminador de luz azul. Analisando os resultados, constatou-se que a extração pelo método de Lahiri & Nurnberger otimizado por Salazar apresentou melhor eficiência e vantagem frente aos demais métodos estudados, já que foi o único em que foi possível visualizar o gene ampliado, além de ser considerado o método mais prático, rápido e atóxico.