Avaliação imunobioquímica de células com diferentes perfis de ciclagem em leucemias agudas

• Autor(a) principal: Dias, Camila kehl
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/240076
• topic: Leucemia-linfoma linfoblástico de células precursoras B; Leucemia mielóide aguda; Expressão gênica; Imunofenotipagem; Acute lymphoblastic leukemia type B; B-ALL; Acute myeloid leukemia; AML; Immunometabolism; Slow-cycling phenotype; Leukemia stem cells; Immune checkpoints

Alterações relevantes como: reprogramação metabólica, mudança no perfil de expressão gênica, proteica e interação com células do sistema imune são observadas nas células precursoras mieloides e linfoides presentes na medula óssea, como a Leucemia Mieloide Aguda (LMA) e a Leucemia Linfocítica Aguda (LLA-B). Dessa forma, é necessário investigar formas de identificar e atingir as células que são consideradas as maiores responsáveis pela resistência e recorrência, dentre as diferentes populações neoplásicas. Por isso, neste projeto, propusemos a avaliação de características do metabolismo e de diversos marcadores de células slow-cycling ou marcadores de Leukemia Stem Cells (LSCs). Primeiramente, analisamos dados de expressão gênica disponíveis publicamente de pacientes de LMA e LLA-B, onde comparamos a expressão de diversos marcadores associados com as LSCs e as células slow-cycling em amostras recorrentes de medula e amostras primárias de medula. Observamos um enriquecimento de expressão de genes da assinatura de LSCs e células slow-cycling nas amostras recorrentes, assim como identificamos grupos de genes, diferentes para LLA-B e LMA, que apresentam potencial como biomarcadores de LSCs ou células slow-cycling e para detecção da Doença Residual Mínima (DRM). Além disso, observamos conjuntos de vias enriquecidas nas amostras recorrentes que podem indicar processos metabólicos relevantes para a persistência de células leucêmicas após o tratamento. Em seguida, analisamos amostras de medula de pacientes com LMA ou LLA-B no momento do diagnóstico e no momento da primeira avaliação da DRM. As análises foram realizadas antes e após o tratamento dos pacientes de forma a identificar possíveis alterações nas populações celulares mediante tratamento. Esta abordagem permitiu uma análise única sobre as populações tumorais de cada paciente e como elas respondem ao tratamento. Adicionalmente, a análise dos resultados estratificados de acordo com o risco designado no momento do diagnóstico possibilitou a visualização de diferentes perfis entre os pacientes, que, eventualmente, podem contribuir para estratégias de alocação de risco e prognóstico. Analisamos a expressão gênica de um conjunto de genes de interesse por estarem envolvidos em vias metabólicas e processos biológicos relevantes aos fenótipos slow-cycling e de LSCs e observamos diferenças de expressão entre diagnóstico e DRM, a maioria dos genes analisados apresentou aumento de expressão na DRM. Realizamos uma análise populacional dos blastos dos pacientes de LLA-B e LMA por imunofenotipagem, observando a expressão de marcadores de interesse e de checkpoints imunes. As populações mais imaturas de blastos (CD34+) apresentaram maior expressão dos marcadores analisados, em geral. Também observamos a expressões de checkpoints imunes em populações de células imunes (monócitos, linfócitos e neutrófilos) destes mesmos pacientes, quando possível. Por fim, observamos características do metabolismo das células nestas amostras, antes e após o tratamento, em relação à glicólise, metabolismo de ácidos graxos, fosforilação oxidativa. Também observamos a capacidade de quimiorresistência diferencial entre células slow- e fast-cycling. O entendimento do funcionamento diferencial das LSCs e das células slow-cycling em relação às outras populações de células leucêmicas é crucial não apenas para encontrar tratamentos que as atinjam especificamente, como também para identificá-las propriamente, com as ferramentas atuais de diagnóstico, além de abrir caminho para novos alvos de tratamento que compreendem a complexidade da heterogeneidade tumoral.