Análise do transcritoma de Anthonomus grandis e avaliação de um gene com potencial aplicação para controle do inseto por silenciamento gênico

• Autor(a) principal: Firmino, Alexandre Augusto Pereira
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/131969
• topic: Anthonomus grandis; Transcriptoma

O algodoeiro sofre o ataque de diversos insetos-praga, sendo o principal o bicudodo- algodoeiro (Anthonomus grandis). Visando alternativas mais eficazes para o controle de insetos, tem-se buscado a transgenia de plantas, por meio da introdução de genes que codificam moléculas entomotóxicas. Entre as diferentes estratégias de engenharia genética utilizadas para controle de insetos-praga, a estratégia envolvendo o silenciamento gênico, pelo uso da interferência mediada por RNA (RNAi), é atualmente bastante promissora e de grande relevância. O trabalho aqui apresentado resultou na geração de uma biblioteca completa de genes expressos de A. grandis, por meio de sequenciamento completo de ESTs, obtidas a partir de diferentes estágios do desenvolvimento do inseto. O pirosequenciamento do transcritoma de A. grandis gerou mais de 500.000 reads e um banco de dados com 20.841 contigs com alta qualidade. Após a montagem e anotação das sequências foram realizadas buscas por genes essenciais do inseto, candidatos ao silenciamento por RNAi. Um desses genes, que codifica a enzima lacase2, foi selecionado e avaliado, mostrando alto potencial para o controle do bicudo do algodoeiro. Esta enzima faz parte do processo de formação e esclerotização da cutícula do inseto. Sua expressão se mostrou quantitativamente maior nas fases mais tardias do ciclo de vida do inseto. Observou-se que a expressão relativa dos transcritos de lacase2 foi altamente reduzida e o desenvolvimento do inseto foi afetado pelo silenciamento gênico. Além da validação do gene de lacase2 para potencial controle do bicudo, este trabalho disponibiliza dados para a escolha de genes de referência para experimentos de quantificação relativa de transcritos por PCR em tempo real em várias partes de larvas e adultos de A. grandis. O conjunto de dados aqui obtidos poderá contribuir enormemente para o agronegócio brasileiro e será de grande importância para a obtenção e geração de eventos de algodão transgênicos resistentes ao bicudo do algodoeiro.