Análise do comportamento de um biofilme dual-espécie frente a ação do hipoclorito de sódio 2% e avaliação da influência de sua estrutura na ação química do hipoclorito de sódio, da clorexidina e do EDTA : um estudo in vitro

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Busanello, Fernanda Hoffmann
Data de Publicação: 2017
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/210672
Resumo: Este estudo teve dois objetivos principais. Primeiro, investigar a influência da estrutura do biofilme no efeito antimicrobiano de três irrigantes endodônticos: hipoclorito de sódio (NaOCl) 2%, clorexidina (CHX) 2% e ácido etilenodiamino tetracético (EDTA) 17%. Segundo, avaliar o efeito químico de NaOCl 2% sob diferentes tempos e volumes, aplicados em um biofilme padronizado com uma superfície de contato realista. Na primeira parte do estudo, S. oralis J22 e A. naeslundii T14V-J1 foram cultivados em discos de hidroxiapatita revestidos com saliva, em três diferentes condições de crescimento: biofilmes com crescimento estático em ambientes confinados durante dez dias (10SB) e quatro dias (4SB) (biofilmes ricos em água) e biofilmes crescidos por compactação durante quatro dias (CDFFB) (biofilmes ricos em células). NaOCl 2%, CHX 2% e EDTA 17% e tampão adesivo (controle) foram aplicados com volume de 20 µl durante 60 segundos. As espécimes foram analisadas previamente por Tomografia de Coerência Óptica e, após a aplicação de antimicrobianos, avaliados por meio do Teste de Resistência à Baixa Compressão, Tomografia de Coerência Óptica, e Microscopia Confocal a Laser. Na segunda parte da investigação, S. oralis J22 e A. naeslundii T14V-J1 foram crescidos por compactação durante quatro dias em discos de hidroxiapatita revestidos com saliva (biofilmes ricos em células). As amostras foram analisadas previamente por Tomografia de Coerência Óptica. NaOCl 2% foi aplicado sobre a superfície dos biofilmes em quantidades de 20 µl e 40 µl durante os períodos de 60, 120 e 300 segundos e um tampão adesivo foi aplicado em quantidade de 20 µl por 60 segundos (controle). Após a aplicação das soluções, biofilmes foram avaliados por meio do Teste de Resistência à Baixa Compressão, Tomografia de Coerência Óptica, e Microscopia Confocal a Laser. Os resultados do estudo mostraram uma maior redução de altura da camada rígida de biofilme com a aplicação do NaOCl 2% em 4SB e 10SB do que CDFFB (p = .028 / .016) Biofilmes desafiados com CHX apresentaram contração estrutural, com maior intensidade em CDFFB (p=0,05) e maior quantidade de substâncias poliméricas extracelulares (p=0,03). Após a aplicação de EDTA 17%, os biofilmes de CDFF mostraram uma redução de altura (p = 0,022). Com relação aos diferentes volumes e períodos de tempos de aplicação de NaOCl 2%, observou-se que, com 20µl, não houve diferença significativa entre 60 e 120 segundos (p = 0,086). Após 300 segundos, dissolveu-se uma espessura maior de camada rígida da estrutura do biofilme em comparação com 120 segundos (p = 0,017). Ao se aplicar 40µl, observou-se que a altura da camada rígida do biofilme foi significativamente reduzida após 120 (p = 0,028) e 300 (p = 0,013) segundos em comparação com 60 segundos e a camada de superficial do biofilme remanescente foi significativamente maior após 300 s em comparação com 60 segundos (p = 0,013). A partir desse estudo, pode-se concluir que a Tomografia de Coerência Óptica apresenta-se como um método interessante, não invasivo, em tempo real, que permite avaliar a estrutura dos biofilmes antes e após a aplicação de soluções antimicrobianas. A estrutura do biofilme exerce uma influência sobre o efeito de diferentes antimicrobianos, os quais podem apresentar um efeito sobre o biofilme remanescente. Ainda, os aspectos do tempo de aplicação e do volume de irrigante devem ser levados em consideração na elaboração de estratégias efetivas para dissolver e interromper a estrutura do biofilme e / ou influenciar a estrutura do biofilme remanescente.
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NaOCl 2%, CHX 2% e EDTA 17% e tampão adesivo (controle) foram aplicados com volume de 20 µl durante 60 segundos. As espécimes foram analisadas previamente por Tomografia de Coerência Óptica e, após a aplicação de antimicrobianos, avaliados por meio do Teste de Resistência à Baixa Compressão, Tomografia de Coerência Óptica, e Microscopia Confocal a Laser. Na segunda parte da investigação, S. oralis J22 e A. naeslundii T14V-J1 foram crescidos por compactação durante quatro dias em discos de hidroxiapatita revestidos com saliva (biofilmes ricos em células). As amostras foram analisadas previamente por Tomografia de Coerência Óptica. NaOCl 2% foi aplicado sobre a superfície dos biofilmes em quantidades de 20 µl e 40 µl durante os períodos de 60, 120 e 300 segundos e um tampão adesivo foi aplicado em quantidade de 20 µl por 60 segundos (controle). Após a aplicação das soluções, biofilmes foram avaliados por meio do Teste de Resistência à Baixa Compressão, Tomografia de Coerência Óptica, e Microscopia Confocal a Laser. Os resultados do estudo mostraram uma maior redução de altura da camada rígida de biofilme com a aplicação do NaOCl 2% em 4SB e 10SB do que CDFFB (p = .028 / .016) Biofilmes desafiados com CHX apresentaram contração estrutural, com maior intensidade em CDFFB (p=0,05) e maior quantidade de substâncias poliméricas extracelulares (p=0,03). Após a aplicação de EDTA 17%, os biofilmes de CDFF mostraram uma redução de altura (p = 0,022). Com relação aos diferentes volumes e períodos de tempos de aplicação de NaOCl 2%, observou-se que, com 20µl, não houve diferença significativa entre 60 e 120 segundos (p = 0,086). Após 300 segundos, dissolveu-se uma espessura maior de camada rígida da estrutura do biofilme em comparação com 120 segundos (p = 0,017). Ao se aplicar 40µl, observou-se que a altura da camada rígida do biofilme foi significativamente reduzida após 120 (p = 0,028) e 300 (p = 0,013) segundos em comparação com 60 segundos e a camada de superficial do biofilme remanescente foi significativamente maior após 300 s em comparação com 60 segundos (p = 0,013). A partir desse estudo, pode-se concluir que a Tomografia de Coerência Óptica apresenta-se como um método interessante, não invasivo, em tempo real, que permite avaliar a estrutura dos biofilmes antes e após a aplicação de soluções antimicrobianas. A estrutura do biofilme exerce uma influência sobre o efeito de diferentes antimicrobianos, os quais podem apresentar um efeito sobre o biofilme remanescente. Ainda, os aspectos do tempo de aplicação e do volume de irrigante devem ser levados em consideração na elaboração de estratégias efetivas para dissolver e interromper a estrutura do biofilme e / ou influenciar a estrutura do biofilme remanescente.This study had two main objectives. First, to investigate the influence of the biofilm structure on the antibiofilm effect of three endodontic irrigants: 2% sodium hypochlorite (NaOCl), 2% chlorhexidine (CHX) and ethylenediaminetetraacetic acid 17% (EDTA). Second, to evaluate the chemical effect of 2% NaOCl under different times and volumes, applied on a standardized biofilm with a realistic contact surface. In the first part of the study, S. oralis J22 and A. naeslundii T14V-J1 were cultured on saliva-coated hydroxyapatite discs under three different growth conditions: static growth biofilms in confined environments for 10 days (10SB) and four days (waterrich biofilms) and biofilms grown under compression for four day (CDFFB) (cell-rich biofilms). 2% NaOCl, 2% CHX and 17% EDTA and adhesion buffer (control) were applied with a volume of 20 μl for 60 seconds. The specimens were previously analyzed by Optical Coherence Tomography and, after the application of antimicrobials, evaluated by the Low-load Compression Tester, Optical Coherence Tomography, and Confocal Laser Scanning Microscopy. In the second part of the investigation, S. oralis J22 and A. naeslundii T14V-J1 were grown by compaction for four days on saliva-coated hydroxyapatite discs (cell-rich biofilms). The samples were previously analyzed by Optical Coherence Tomography. 2% NaOCl was applied on the surface of the biofilms with amounts of 20 μl and 40 μl during the 60, 120 and 300 second periods and an adhesive buffer was applied in amount of 20 μl for 60 seconds (control). After application of the solutions, biofilms were evaluated through the Low Compression Resistance Test, Optical Coherence Tomography, and Laser Confocal Microscopy. The results of the study showed a greater reduction of height of the rigid layer of biofilm with the application of 2% NaOCl in 4SB and 10SB than CDFFB (p = .028 / .016) Biofilms challenged with CHX presented structural contraction, with greater intensity in CDFFB (p = 0.05) and higher amount of extracellular polymer substances (p = 0.03). After application of 17% EDTA, CDFF biofilms showed a decrease in height (p = 0.022). Regarding the different volumes and periods of application time of 2% NaOCl, it was observed that, with 20 μl, there was no significant difference between 60 and 120 seconds (p = 0.086). After 300 seconds, a greater thickness of rigid layer of the biofilm structure was dissolved compared to 120 seconds (p = 0.017). When applying 40μl, it was observed that the height of the rigid layer of the biofilm was significantly reduced after 120 (p = 0.028) and 300 (p = 0.013) seconds compared to 60 seconds and the remaining biofilm surface layer was significantly larger After 300 s compared to 60 seconds (p = 0.013). From this study, it can be concluded that Optical Coherence Tomography presents as an interesting, non-invasive, real-time method that allows the biofilms structure evaluation before and after the application of antimicrobial solutions. The biofilm structure exerts an influence on the effect of different antimicrobials, which may have an effect on the remaining biofilm. In addition, aspects of application time and irrigant volume should be taken into account when devising effective strategies to dissolve and disrupt the biofilm structure and / or influence the structure of the remaining biofilm.application/pdfporBiofilmesHipoclorito de sódioClorexidinaBiofilmsIrrigant solutionsVisco-elasticOptical coherence tomographyAnálise do comportamento de um biofilme dual-espécie frente a ação do hipoclorito de sódio 2% e avaliação da influência de sua estrutura na ação química do hipoclorito de sódio, da clorexidina e do EDTA : um estudo in vitroinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisUniversidade Federal do Rio Grande do SulFaculdade de OdontologiaPrograma de Pós-Graduação em OdontologiaPorto Alegre, BR-RS2017doutoradoinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGSinstname:Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)instacron:UFRGSTEXT001022037.pdf.txt001022037.pdf.txtExtracted Texttext/plain141109http://www.lume.ufrgs.br/bitstream/10183/210672/2/001022037.pdf.txt5e6556fa30ae993cb8a0a83373d2f195MD52ORIGINAL001022037.pdfTexto completoapplication/pdf1512872http://www.lume.ufrgs.br/bitstream/10183/210672/1/001022037.pdfed55dad24c14cafafd0b30c902e849e0MD5110183/2106722020-06-27 03:39:33.104438oai:www.lume.ufrgs.br:10183/210672Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttps://lume.ufrgs.br/handle/10183/2PUBhttps://lume.ufrgs.br/oai/requestlume@ufrgs.br||lume@ufrgs.bropendoar:18532020-06-27T06:39:33Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS - Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)false
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