Identificação de novos biomarcadores e potenciais alvos terapêuticos para a Doença de Gaucher: um estudo com ênfase na β2-microglobulina, ferritina e hepcidina

• Autor(a) principal: Koppe, Tiago de Bone
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/254096
• topic: Doença de Gaucher; Biomarcadores; Hepcidinas; Ferritina; β2-microglobulin

INTRODUÇÃO: A Doença de Gaucher (DG) é uma esfingolipidose causada pela deficiência de β- glicosidase. Ela apresenta alterações multissistêmicas, que não são completamente tratadas com as modalidades atuais de tratamento. Mediadores humorais alterados, nesse sentido, têm contribuído tanto para o avanço da elucidação fisiopatológica e proposição de novos alvos terapêuticos quanto para a descoberta de novos biomarcadores. Entre tais, há sugestões na literatura de prejuízo à homeostase do ferro, fato relevante devido ao seu potencial de gerar estresse oxidativo e poder atuar como fator modificador da doença. OBJETIVOS: 1) propor, para a DG, hepcidina e β2-microglobulina como novos biomarcadores e avaliar a utilidade da ferritina (total e glicosilada) em pacientes brasileiros; 2) sugerir tanto o ferro como fator modificador quanto o mecanismo etiológico da anemia na DG e 3) identificar novos fármacos moduladores de hepcidina in vitro e in vivo. METODOLOGIA: Para os objetivos 1) e 2), a amostra foi proveniente do Centro de Referência para Doença de Gaucher do Rio Grande do Sul, os dados clínicos obtidos por meio de revisão dos prontuários e a quantificação de hepcidina, ferritina glicosilada e IL-6 realizadas por técnica de ELISA. Em relação ao objetivo 3), hepatócitos humanos com sistema reporter para hepcidina foram tratados com fármacos específicos e tiveram os efeitos in vitro aferidos espectrofotometricamente e com Real-Time PCR e Western Blot para genes e proteínas de interesse. Os efeitos in vivo foram testados em camundongos wild type ou HbbTh3+/− . RESULTADOS: Objetivo 1): avaliou-se β2-microglobulina em 31 pacientes com mediana de 2180 [1880-2919] ng/mL e correlação com quitotriosidase (ρ=0,65; p<0,01) e plaquetas (ρ=−0,42; p=0,02). Ainda, os escores de gravidade foram mais elevados em pacientes com elevação de β2- microglobulina do que nos sem elevação (4 [3–6,5] vs. 2,5 [1–4,2]; p=0,04). Comparações pré- e pós-tratamento revelaram redução da β2-microglobulina (2931 vs. 1970 ng/mL; p<0,01; n=8). Avaliou-se a hepcidina em 34 pacientes, nos quais a mediana foi 106,3 [72,1-194] ng/mL (referência 65,8 ng/mL) e correlacionada, em modelo de regressão múltipla, com quitotriosidase e ALT. Comparações pré- e pós-tratamento mostraram redução da hepcidina 101,2 [67,2-225] vs 57,3 [24,5-113,5] ng/mL (p=0,026; n=19). Não houve correlação com a forma glicosilada de ferritina, bem como não houve diferença dela com sua forma total. Ainda, avaliamos em 18 pacientes virgens de tratamento o efeito da terapia-padrão sobre a concentração sérica de ferritina total. Nesses, inicialmente havia hiperferritinemia, revertida após o tratamento (756 [318-1441] vs. 521 [227-626] ng/mL; p=0.025) e acompanhado de melhora clínica global. Não houve correlação com gravidade. Objetivo 2) a hepcidina se correlacionou com IL-6 ("=0,36; p=0,038; n=34) e VCM ("=-0,37; p=0,035; n=33). Após um período de observação, juntamente com a redução dos níveis de hepcidina, houve incremento na saturação de transferrina (24 [17,6-27,6] vs. 31,6 [24,3-35,9]%; p=0,023; n=23), no ferro sérico (78 [57-90] vs. 86 [76,5-102] μg/mL; p=0,037; n=25) e VCM (84,6 [79,7-90,3] vs. 87,7 [82,3-93,1] fL; p<0,001; n=33). Objetivo 3) identificamos 13 fármacos com efeito na expressão hepcidina. Mostramos também que a ipriflavona reduz o ferro hepático e a expressão intestinal de ferroportina, bem como aumenta os transcritos e a concentração sérica de hepcidina em camundongos wild type. CONCLUSÃO: Propomos a hepcidina e a β2-microglobulina como novos biomarcadores e comprovamos a utilidade da ferritina total como biomarcador de resposta ao tratamento em pacientes brasileiros com DG. Hepcidina e IL-6 elevados e hipoferremia com microcitose, revertidos após um período sob tratamento, sugerem a anemia inflamatória como a etiologia na DG e sugerem que pode haver sobrecarga tecidual de ferro paradoxal. Por fim, os fármacos identificados, além de representarem potenciais medicamentos moduladores do metabolismo do ferro, forneceram as bases para que estratégias similares sejam testadas em modelos de DG, resultando em novas terapias para a DG.