Extraction of DNA for analysis of amelogenin in samples fixed in formalin, embedded in paraffin stored for 1 and 5 years in the Department of Pathology - Federal University of Sao Paulo
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Data de Publicação: | 2013 |
Outros Autores: | |
Tipo de documento: | Artigo |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Saúde, Ética & Justiça (Online) |
Texto Completo: | https://www.revistas.usp.br/sej/article/view/57835 |
Resumo: | O uso da biologia molecular em amostras fi xadas em formalina e incluídas em parafi na (FFPE) vem crescendo, e a melhoria nos métodos de obtenção do DNA para sua análise é necessária. O objetivo deste estudo foi avaliar o DNA extraído de blocos de tecidos FFPE (fígado, baço e cérebro não tumorais), obtidos de necropsia, 8 a 24 horas post mortem, utilizando três métodos de extração de DNA (kit comercial, fenolclorofórmio e Salting-Out). Foram realizadas as PCRs dos genes da actina (136pb), amelogenina humana (AMEL 212-218pb) e STRs (100-400pb) para avaliar a efi cácia do método de extração de DNA e determinar o sexo dos indivíduos. Foram utilizados 28 casos arquivados (1 e 5 anos) e 12 recentes, sendo analisadas 10 amostras de cada um dos tecidos. O kit comercial apresentou maior grau de pureza, resultados reprodutíveis e consistentes na amplifi cação por PCR nos genes da -actina e AMEL e na análise por STR. Este estudo fornece uma compreensão dos desafi os envolvendo amostras FFPE, e esclareceu novas estratégias para análises moleculares neste tipo de material. |
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Extraction of DNA for analysis of amelogenin in samples fixed in formalin, embedded in paraffin stored for 1 and 5 years in the Department of Pathology - Federal University of Sao PauloExtração de DNA para análise da amelogenina em amostras fixadas em formalina, incluídas em parafina e armazenadas por 1 e 5 anos no Departamento de Patologia da Universidade Federal de São PauloPCRSTRAutópsiaPatologia MolecularFFPE.O uso da biologia molecular em amostras fi xadas em formalina e incluídas em parafi na (FFPE) vem crescendo, e a melhoria nos métodos de obtenção do DNA para sua análise é necessária. O objetivo deste estudo foi avaliar o DNA extraído de blocos de tecidos FFPE (fígado, baço e cérebro não tumorais), obtidos de necropsia, 8 a 24 horas post mortem, utilizando três métodos de extração de DNA (kit comercial, fenolclorofórmio e Salting-Out). Foram realizadas as PCRs dos genes da actina (136pb), amelogenina humana (AMEL 212-218pb) e STRs (100-400pb) para avaliar a efi cácia do método de extração de DNA e determinar o sexo dos indivíduos. Foram utilizados 28 casos arquivados (1 e 5 anos) e 12 recentes, sendo analisadas 10 amostras de cada um dos tecidos. O kit comercial apresentou maior grau de pureza, resultados reprodutíveis e consistentes na amplifi cação por PCR nos genes da -actina e AMEL e na análise por STR. Este estudo fornece uma compreensão dos desafi os envolvendo amostras FFPE, e esclareceu novas estratégias para análises moleculares neste tipo de material.Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina. Departamento de Medicina Legal, Ética Médica e Medicina do Trabalho.2013-12-26info:eu-repo/semantics/articleinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionART.application/pdfhttps://www.revistas.usp.br/sej/article/view/5783510.11606/issn.2317-2770.v18ispep39-44Saúde Ética & Justiça ; v. 18 (2013); 39-442317-2770reponame:Saúde, Ética & Justiça (Online)instname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPporhttps://www.revistas.usp.br/sej/article/view/57835/60883Funabashi, Karina SIwamura, Edna SMinfo:eu-repo/semantics/openAccess2016-02-03T15:49:27Zoai:revistas.usp.br:article/57835Revistahttps://www.revistas.usp.br/sej/indexPUBhttps://www.revistas.usp.br/sej/oairevistasej@fm.usp.br||2317-27701414-218Xopendoar:2016-02-03T15:49:27Saúde, Ética & Justiça (Online) - Universidade de São Paulo (USP)false |
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