Clonagem e expressão da celulase Xf-818 de Xylella Fastidiosa em Escherichia Coli
Autor(a) principal: | |
---|---|
Data de Publicação: | 2003 |
Outros Autores: | , |
Tipo de documento: | Artigo |
Idioma: | eng |
Título da fonte: | Scientia Agrícola (Online) |
Texto Completo: | https://www.revistas.usp.br/sa/article/view/21909 |
Resumo: | Xylella fastidiosa foi a primeira bactéria fitopatogênica que teve seu genoma completamente seqüenciado. A identificação de diversos genes, através de similaridade de seqüências, indicou os possíveis mecanismos de patogenicidade da bactéria. Entretanto, a determinação da função de um gene requer a confirmação experimental e, neste aspecto, a expressão heteróloga é uma poderosa ferramenta. X. fastidiosa coloniza somente o xilema das plantas hospedeiras e a identificação putativa de diversos genes semelhantes a enzimas que degradam a parede celular vegetal, estimularam o presente estudo de catacterização destas enzimas. A clonagem da ORF Xf-818 de X. fastidiosa no vetor de expressão pET20b possibilitou a produção da proteína heterologamente em E. coli. O emprego de IPTG a 0,4 mmol L-1 com 12 h a 32°C, possibilitou as melhores condições para E. coli produzir a proteína heteróloga. Clones de E. coli que expressam Xf-818, apresentam atividade celulásica, degradando eficientemente a celulose. A identificação de Xf-818 como uma endoglicanase foi assim confirmada. |
id |
USP-18_81d8f96f54caea7af660244faaf857d9 |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:revistas.usp.br:article/21909 |
network_acronym_str |
USP-18 |
network_name_str |
Scientia Agrícola (Online) |
repository_id_str |
|
spelling |
Clonagem e expressão da celulase Xf-818 de Xylella Fastidiosa em Escherichia Coli Cloning and expression of cellulase XF-818 of Xylella fastidiosa in Escherichia Coli clorose variegada dos citroscelulasesclonagem e expressãocitrus variegated chlorosiscellulasescloning and expresssion Xylella fastidiosa foi a primeira bactéria fitopatogênica que teve seu genoma completamente seqüenciado. A identificação de diversos genes, através de similaridade de seqüências, indicou os possíveis mecanismos de patogenicidade da bactéria. Entretanto, a determinação da função de um gene requer a confirmação experimental e, neste aspecto, a expressão heteróloga é uma poderosa ferramenta. X. fastidiosa coloniza somente o xilema das plantas hospedeiras e a identificação putativa de diversos genes semelhantes a enzimas que degradam a parede celular vegetal, estimularam o presente estudo de catacterização destas enzimas. A clonagem da ORF Xf-818 de X. fastidiosa no vetor de expressão pET20b possibilitou a produção da proteína heterologamente em E. coli. O emprego de IPTG a 0,4 mmol L-1 com 12 h a 32°C, possibilitou as melhores condições para E. coli produzir a proteína heteróloga. Clones de E. coli que expressam Xf-818, apresentam atividade celulásica, degradando eficientemente a celulose. A identificação de Xf-818 como uma endoglicanase foi assim confirmada. Xylella fastidiosa's genome was the first of a plant pathogen to be completely sequenced. Through comparative sequence analysis many genes were identified and, among them, several potentially involved in plant-pathogen interaction. However, the biological role of each gene should be assigned experimentally. On this regard, heterologous protein expression is a powerful tool to produce proteins from such genes, allowing their characterization. X. fastidiosa lives inside xylem vessels and eventually would degrade pit membranes from xylem cells to move radialy into the host. The identification of several putative plant cell wall degrading enzymes on X. fastidiosa genome prompted the assession of the function of such proteins. The open reading frame (ORF) Xf-818 was cloned into expression vector pET20b and E. coli cells harboring such plasmid exhibited cellulase activity. Using IPTG at 0.4 mmol L-1 with a 12 h incubation at 32°C are the best conditions to produce higher amounts of heterologous protein. The enzyme degrades cellulose confirming the endoglucanase activity of Xf-818. Universidade de São Paulo. Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz2003-12-01info:eu-repo/semantics/articleinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionapplication/pdfhttps://www.revistas.usp.br/sa/article/view/2190910.1590/S0103-90162003000400016Scientia Agricola; v. 60 n. 4 (2003); 715-721Scientia Agricola; Vol. 60 Núm. 4 (2003); 715-721Scientia Agricola; Vol. 60 No. 4 (2003); 715-7211678-992X0103-9016reponame:Scientia Agrícola (Online)instname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPenghttps://www.revistas.usp.br/sa/article/view/21909/23933Copyright (c) 2015 Scientia Agricolainfo:eu-repo/semantics/openAccessWulff, Nelson ArnoCarrer, HelainePascholati, Sérgio Florentino2015-07-07T16:41:37Zoai:revistas.usp.br:article/21909Revistahttp://revistas.usp.br/sa/indexPUBhttps://old.scielo.br/oai/scielo-oai.phpscientia@usp.br||alleoni@usp.br1678-992X0103-9016opendoar:2015-07-07T16:41:37Scientia Agrícola (Online) - Universidade de São Paulo (USP)false |
dc.title.none.fl_str_mv |
Clonagem e expressão da celulase Xf-818 de Xylella Fastidiosa em Escherichia Coli Cloning and expression of cellulase XF-818 of Xylella fastidiosa in Escherichia Coli |
title |
Clonagem e expressão da celulase Xf-818 de Xylella Fastidiosa em Escherichia Coli |
spellingShingle |
Clonagem e expressão da celulase Xf-818 de Xylella Fastidiosa em Escherichia Coli Wulff, Nelson Arno clorose variegada dos citros celulases clonagem e expressão citrus variegated chlorosis cellulases cloning and expresssion |
title_short |
Clonagem e expressão da celulase Xf-818 de Xylella Fastidiosa em Escherichia Coli |
title_full |
Clonagem e expressão da celulase Xf-818 de Xylella Fastidiosa em Escherichia Coli |
title_fullStr |
Clonagem e expressão da celulase Xf-818 de Xylella Fastidiosa em Escherichia Coli |
title_full_unstemmed |
Clonagem e expressão da celulase Xf-818 de Xylella Fastidiosa em Escherichia Coli |
title_sort |
Clonagem e expressão da celulase Xf-818 de Xylella Fastidiosa em Escherichia Coli |
author |
Wulff, Nelson Arno |
author_facet |
Wulff, Nelson Arno Carrer, Helaine Pascholati, Sérgio Florentino |
author_role |
author |
author2 |
Carrer, Helaine Pascholati, Sérgio Florentino |
author2_role |
author author |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Wulff, Nelson Arno Carrer, Helaine Pascholati, Sérgio Florentino |
dc.subject.por.fl_str_mv |
clorose variegada dos citros celulases clonagem e expressão citrus variegated chlorosis cellulases cloning and expresssion |
topic |
clorose variegada dos citros celulases clonagem e expressão citrus variegated chlorosis cellulases cloning and expresssion |
description |
Xylella fastidiosa foi a primeira bactéria fitopatogênica que teve seu genoma completamente seqüenciado. A identificação de diversos genes, através de similaridade de seqüências, indicou os possíveis mecanismos de patogenicidade da bactéria. Entretanto, a determinação da função de um gene requer a confirmação experimental e, neste aspecto, a expressão heteróloga é uma poderosa ferramenta. X. fastidiosa coloniza somente o xilema das plantas hospedeiras e a identificação putativa de diversos genes semelhantes a enzimas que degradam a parede celular vegetal, estimularam o presente estudo de catacterização destas enzimas. A clonagem da ORF Xf-818 de X. fastidiosa no vetor de expressão pET20b possibilitou a produção da proteína heterologamente em E. coli. O emprego de IPTG a 0,4 mmol L-1 com 12 h a 32°C, possibilitou as melhores condições para E. coli produzir a proteína heteróloga. Clones de E. coli que expressam Xf-818, apresentam atividade celulásica, degradando eficientemente a celulose. A identificação de Xf-818 como uma endoglicanase foi assim confirmada. |
publishDate |
2003 |
dc.date.none.fl_str_mv |
2003-12-01 |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
format |
article |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
https://www.revistas.usp.br/sa/article/view/21909 10.1590/S0103-90162003000400016 |
url |
https://www.revistas.usp.br/sa/article/view/21909 |
identifier_str_mv |
10.1590/S0103-90162003000400016 |
dc.language.iso.fl_str_mv |
eng |
language |
eng |
dc.relation.none.fl_str_mv |
https://www.revistas.usp.br/sa/article/view/21909/23933 |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
Copyright (c) 2015 Scientia Agricola info:eu-repo/semantics/openAccess |
rights_invalid_str_mv |
Copyright (c) 2015 Scientia Agricola |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.format.none.fl_str_mv |
application/pdf |
dc.publisher.none.fl_str_mv |
Universidade de São Paulo. Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz |
publisher.none.fl_str_mv |
Universidade de São Paulo. Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz |
dc.source.none.fl_str_mv |
Scientia Agricola; v. 60 n. 4 (2003); 715-721 Scientia Agricola; Vol. 60 Núm. 4 (2003); 715-721 Scientia Agricola; Vol. 60 No. 4 (2003); 715-721 1678-992X 0103-9016 reponame:Scientia Agrícola (Online) instname:Universidade de São Paulo (USP) instacron:USP |
instname_str |
Universidade de São Paulo (USP) |
instacron_str |
USP |
institution |
USP |
reponame_str |
Scientia Agrícola (Online) |
collection |
Scientia Agrícola (Online) |
repository.name.fl_str_mv |
Scientia Agrícola (Online) - Universidade de São Paulo (USP) |
repository.mail.fl_str_mv |
scientia@usp.br||alleoni@usp.br |
_version_ |
1800222786736619520 |