Comparação de diferentes métodos de incorporação de DNA exógeno pelo espermatozoide bovino

• Autor(a) principal: Simões, Renata
• Data de Publicação: 2015
• Outros Autores: Feitosa, Weber Beringui, Milazzotto, Marcella Pecora, Nicacio, Alessandra Corallo, Barros, Flavia Regina Oliveira de, Gonçalves, José Sergio de Arruda, Marques, Mariana Groke, Visintin, José Antônio, Assumpção, Mayra Elena Ortiz D'Ávila
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: eng
• Título da fonte: Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science
• Texto Completo: https://www.revistas.usp.br/bjvras/article/view/82459
• topic: Espermatozoides; Bovino; Transgenia animal; Produção in vitro; Embriões; Spermatozoa; Cattle; Animal transgenesis; In vitro fertilization; Embryos

Apesar da manipulação genética de animais domésticos ser de grande interesse para a produção animal e para a indústria farmacêutica, a sua eficiência ainda é insatisfatória. A injeção pronuclear, a técnica mais utilizada para tal proposito, principalmente em camundongos, ainda apresenta limitações para esta espécie. Algumas alternativas têm sido desenvolvidas como o uso de espermatozoides como vetores para transferência genica, na qual a célula espermática tem habilidade espontânea de se ligar a molécula de DNA e internaliza-la. Dado o potencial da transferência genica mediada por espermatozoide para animais domésticos transgênicos, o objetivo do presente trabalho foi a avaliação de quatro métodos de incorporação de DNA para a transferência genica mediada por espermatozoides na espécie bovina: incubação com DNA, alteração da membrana plasmática induzida por cálcio ionóforo seguida por incubação com o DNA exógeno, eletroporação e lipofecção. Espermatozoides não expostos ao DNA exógeno foram usados como grupo controle. Os índices de clivagem, blastocisto e eclosão foram avaliados, respectivamente, as 72 horas após a inseminação dos oócitos, bem como, aos 9 e 12 dias de cultivo embrionário. Os embriões positivos para o DNA exógeno foram avaliados por PCR. Nenhum efeito de tratamento foi observado nos índices de clivagem, blastocisto e eclosão. Além disso, a porcentagem de blastocistos positivos para o DNA exógeno não diferiu entre os grupos experimentais. Apesar do baixo número de embriões positivos para DNA exógeno, os resultados obtidos mostram que todos os tratamentos apresentaram eficiências similares. A conclusão obtida foi que, apesar de os índices de desenvolvimento embrionário terem sido similares e constante em todos os grupos experimentais, outros fatores como a sequência, o tamanho e a concentração do DNA exógeno devem ser avaliados para melhorar a transferência genica mediada por espermatozoides.