Estabelecimento de um bioprocesso para proliferação de células estromais mesenquimais derivadas de tecido adiposo humano em biorreator

• Autor(a) principal: Simão, Vinicius Augusto
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-23082020-135727/
• topic: Bioprocess; Bioprocesso; Bioreactor; Biorreator; Células estromais mesenquimais; Frasco spinner; Genotoxicidade; Genotoxicity; Human adipose tissue; Mesenchymal stromal cells; Spinner flask; Tecido adiposo humano

O emprego das CEM (células estromais mesenquimais multipotentes) tem sido considerado uma alternativa terapêutica potencialmente promissora em diversos estudos pré-clínicos e clínicos. O grande interesse das CEM para a terapia celular deve-se a uma série de características, tais como, facilidade de obtenção a partir de diversos tecidos e baixa imunogenicidade, podendo ser empregadas em transplantes alogênicos. Diversos órgãos e tecidos são apontados como fontes potenciais das CTM, destacando-se mais recentemente o tecido adiposo. Em função destes aspectos, busca-se com este projeto a proposição de uma metodologia para proliferação de CEM de tecido adiposo humano em biorreator tipo tanque agitado, visando estabelecer um sistema de proliferação robusto que concilie a eficiência no rendimento celular com um menor prejuízo à qualidade genética do cultivo. Para isso foram conduzidos experimentos em cultura estática, e suspensão de menor escala (frasco spinner) e larga escala (biorreator). Os resultados demonstraram a ausência de influência do volume de meio de cultura sobre o rendimento do cultivo celular em cultura estática. No desenvolvimento de um protocolo de cultivo em frasco spinner os resultados definiram a concentração celular inicial de 30:1 (2,4 x 104 células/mL), regime de adesão celular intermitente a 70 rpm, 10% de SFB no meio de cultura com renovação de 50% do meio a cada 72 h, microcarregador Cultispher-S em 1 g/L e velocidade de agitação de 50 rpm na fase proliferativa. A seguir foi otimizado o cultivo em larga escala em biorreator, que após um delineamento gradual de cada variável do bioprocesso ficou definido como sendo com: concentração celular inicial de 15:1 (1,2 x 104 células/mL), regime de adesão celular intermitente a 70 rpm, 10% de SFB no meio de cultura com renovação de 25% do meio a cada 48 h, velocidade de agitação de 50 rpm na fase proliferativa, pH 7,3, temperatura a 36,5° C, microcarregador Cultispher-S em 1 g/L e concentração de oxigênio dissolvido crescente de 20 a 40% (72 h para intervalo de ajuste). Os cultivos em biorreator também foram avaliados quanto a sua integridade genômica através do ensaio cometa que demonstrou senescência progressiva das células em cultivo e do teste do micronúcleo que foi similar a situação controle do início do cultivo. O trabalho demonstra que avaliações da integridade genômica do cultivo de CEM devem se tornar corriqueiras, para assim atestar confiabilidade à utilização das células proliferadas em larga escala para terapia celular.