Identificação de alvos para o diagnóstico molecular gênero especifico da estrongiloidíase experimental

• Autor(a) principal: Nascimento, Rafael Correa do
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5179/tde-22062021-124425/
• topic: Diagnóstico molecular; DNA ribossomal; Estrongiloidíase; Molecular diagnosis; Polymerase chain reaction; Reação em cadeia polimerase; Ribosomal DNA; Strongyloidiasis

Strongyloides venezuelensis tem sido utilizado em diferentes estudos experimentais, sobretudo aqueles que objetivam avaliar técnicas para o diagnóstico da estrongiloidíase. No presente trabalho, três regiões alvos (gênero,18S e 28S) do DNA ribossomal de S. venezuelensis foram avaliadas para o diagnóstico molecular da estrongiloidíase experimental. Os ratos foram infectados por via subcutânea com 400 e 4.000 larvas infectantes por S. venezuelensis em dois grupos (400L3 e 4.000L3) e mantidas por 35 dias. Amostras fecais foram coletadas diariamente para contar ovos por grama de fezes (OPG) e realizar a reação em cadeia da polimerase (PCR). A eliminação de ovos nas fezes se iniciou no 5º dia pós-infecção (d.p.i.) e terminou nos 33º e 34º d.p.i., nos grupos 400L3 e 4.000L3, respectivamente. Considerando a PCR-Gênero, à amplificação do alvo ocorreu do 6º ao 29º d.p.i. (400L3) e do 6º ao 34º d.p.i. (4.000L3). Para PCR-18S, a amplificação do fragmento alvo foi do 5º ao 30º d.p.i. (400L3), e do 5º ao 31º d.p.i. (4.000L3). Em relação a PCR-28S, pode-se observar que a amplificação do fragmento alvo ocorreu do 1º a 34º d.p.i. (400L3), e do 1º ao 35º d.p.i. (4.000L3). Com base na OPG, as amostras fecais dos 2º, 5º, 8º, 11º, 15º, 23º e 35º d.p.i. foram selecionadas para extração de DNA; seguida pela PCR (gênero, 18S e 28S); e sequenciamento. As sequencias obtidas dos produtos PCR-28S apresentaram 95 a 100% de identidade com as sequências de Strongyloides, para ambos os inoculos. Com isso, é possível reforçar a aplicação da PCR-28S no diagnóstico de estrongiloidíase experimental e humana