Caracterização preliminar do isolamento de oligômeros do peptídeo β-amiloide utilizando o anticorpo de cadeia única NUsc1

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Raquel Maria de Campos
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
Texto Completo: https://doi.org/10.11606/D.17.2018.tde-07022022-140423
Resumo: A Doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativa que afeta atualmente cerca de 47 milhões de pessoas no mundo inteiro. A patogênese da DA tem sido associada a agregados oligoméricos solúveis do peptídeo β-amiloide (AβOs). Por terem sido apontados como os responsáveis por comprometer a plasticidade sináptica e a memoria, os AβOs se tornaram os principais alvos de estudos na busca por tratamentos para a DA. A imunização passiva constitui uma das estratégias terapêuticas mais promissoras para a neutralização dos AβOs. Um anticorpo que tem demonstrado dados promissores quanto à sua especificidade contra subpopulações oligoméricas neurotóxicas é o anticorpo de cadeia única NUsc1. Nesse trabalho, nosso objetivo foi determinar as condições ótimas para a elucidação da massa molecular (estado oligomérico) da(s) espécie(s) oligoméricas do peptídeo β-amiloide alvo do anticorpo de cadeia única NUsc1. Para isso, avaliamos preparações de oligômeros sintéticos submetidos a gel-filtração, na ausência ou presença de NUsc1, através do monitoramento por fluorescência e análises por ELISA, dot blot e espectrometria de massas. Nossos dados mostram que fomos capazes de produzir o anticorpo NUsc1 ligado a fago (pbNUsc1) funcional. Entretanto, em AβOs fracionados por SEC, apenas espécies de baixo peso molecular foram detectados em ELISA usando pbNUsc1 como anticorpo de detecção. Acreditamos que a ausência ou pouca abundância de espécies oligoméricas de Aβ de alto peso molecular na preparação de oligômeros usada nesse trabalho tenha influenciado nesses resultados. A fim de aumentar nossa capacidade de detecção de espécies pouco abundantes, desenvolvemos um método preliminar para detecção de Aβ por espectrometria de massas, visando análises futura do complexo NUsc1/AβOs.
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