Mono-oxigenase lítica de polissacarídeos TtLPMO9H: caracterização e mecanismos moleculares de ativação catalítica
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2022 |
Tipo de documento: | Tese |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP |
Texto Completo: | https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-13102022-082756/ |
Resumo: | A degradação da biomassa lignocelulósica é essencial para o aproveitamento dessa matéria-prima para a produção de biocombustíveis e compostos químicos. Apesar de aplicada há anos, a degradação enzimática dessa biomassa ainda envolve novidades, incluindo um tipo completamente distinto de enzimas, as mono-oxigenases líticas de polissacarídeos (LPMOs), cuja ação potencializa a atividade das hidrolases de glicosídeos que já são utilizadas. Descoberta há pouco mais de uma década, muitos aspectos básicos das LPMOs ainda são desconhecidos. No trabalho desenvolvido, uma LPMO recombinante do ascomiceto Thermothelomyces thermophilus, TtLPMO9H, foi estudada quanto a sua especificidade de substrato, régio-seletividade, estabilidade térmica e ativação. TtLPMO9H, pertencente à família AA9, teve atividade em celulose e hemicelulose, com ação nos carbonos C1 e C4 da cadeia polissacarídica e gerou celo-oligossacarídeos oxidados e não oxidados. Apresentou estabilidade térmica, e esta propriedade foi usada para sua purificação. A enzima teve atividade em ampla extensão de pHs, e a variação deste influenciou o perfil de produtos liberados por TtLPMO9H. Esta LPMO foi ainda ativada por diferentes sistemas, incluindo pequenas moléculas com e sem adição de H2O2, clorofilina e luz, múltiplas oxidoredutases, incluindo duas oxidases que nunca foram reportadas para a ativação de LPMO, e por H2O2. |
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Mono-oxigenase lítica de polissacarídeos TtLPMO9H: caracterização e mecanismos moleculares de ativação catalíticaLytic polysaccharide monooxygenase TtLPMO9H: features and molecular mechanisms of catalytic activation.AA9AA9LPMOLPMOLytic polysaccharide monooxygenaseMono-oxigenase lítica de polissacarídeosA degradação da biomassa lignocelulósica é essencial para o aproveitamento dessa matéria-prima para a produção de biocombustíveis e compostos químicos. Apesar de aplicada há anos, a degradação enzimática dessa biomassa ainda envolve novidades, incluindo um tipo completamente distinto de enzimas, as mono-oxigenases líticas de polissacarídeos (LPMOs), cuja ação potencializa a atividade das hidrolases de glicosídeos que já são utilizadas. Descoberta há pouco mais de uma década, muitos aspectos básicos das LPMOs ainda são desconhecidos. No trabalho desenvolvido, uma LPMO recombinante do ascomiceto Thermothelomyces thermophilus, TtLPMO9H, foi estudada quanto a sua especificidade de substrato, régio-seletividade, estabilidade térmica e ativação. TtLPMO9H, pertencente à família AA9, teve atividade em celulose e hemicelulose, com ação nos carbonos C1 e C4 da cadeia polissacarídica e gerou celo-oligossacarídeos oxidados e não oxidados. Apresentou estabilidade térmica, e esta propriedade foi usada para sua purificação. A enzima teve atividade em ampla extensão de pHs, e a variação deste influenciou o perfil de produtos liberados por TtLPMO9H. Esta LPMO foi ainda ativada por diferentes sistemas, incluindo pequenas moléculas com e sem adição de H2O2, clorofilina e luz, múltiplas oxidoredutases, incluindo duas oxidases que nunca foram reportadas para a ativação de LPMO, e por H2O2.The degradation of lignocellulosic biomass is essential for the use of this raw material to produce biofuels and biochemical compounds. Although it has been applied for years, the enzymatic degradation of this biomass still offers novelties, including a completely different type of enzyme, the lytic polysaccharide monooxygenases (LPMOs), whose action potentiates the activity of the glycoside hydrolases that are already used. Discovered just over a decade ago, many basic aspects of LPMOs are still unknown. In the work developed, a recombinant LPMO of the ascomycete Thermothelomyces thermophilus, TtLPMO9H, was studied for its substrate specificity, regioselectivity, thermal stability and activation. TtLPMO9H, which belongs to the AA9 family, had activity on cellulose and hemicellulose, acted on the C1 and C4 carbons of the polysaccharide chain and generated oxidized and non-oxidized cello-oligosaccharides. It showed thermal stability, and this property was used for its purification. The enzyme had activity over a wide range of pHs, and its variation influenced the profile of products released by TtLPMO9H. This LPMO was further activated by different systems, including small molecules with and without addition of H2O2, chlorophyllin and light, multiple oxidoreductases, including two oxidases that have never been reported to activate LPMO, as well as H2O2.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPPolikarpov, IgorHigasi, Paula Miwa Rabêlo2022-08-04info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-13102022-082756/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2022-10-13T19:20:37Zoai:teses.usp.br:tde-13102022-082756Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212022-10-13T19:20:37Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false |
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