Papel da ubiquitina em garanhões com alta e baixa congelabilidade e aplicação da Coenzima Q-10 como promotora da função mitocondrial espermática

• Autor(a) principal: Lançoni, Renata
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-25062019-111830/
• topic: Citoesqueleto; Criopreservação; Cryopreservation; Cytoskeleton; Equine; Equinos; Qualidade espermática; Sperm quality; Ubiquinol; Ubiquinol

Estudos demonstram que existe grande variabilidade na qualidade de sêmen entre garanhões, isso influencia na capacidade de resistir a criopreservação. A coenzima Q-10 (CoQ-10), é um cofator na cadeia de transporte de elétrons na mitocôndria, essencial para a produção de energia em forma de ATP e pode ser uma alternativa para melhorar a qualidade do sêmen criopreservado equino. Por outro lado, a ubiquitina é uma molécula que está envolvida em uma via de degradação de proteínas danificadas, ou com erros de síntese. Este processo ocorre na passagem do espermatozoide pelo epidídimo e está relacionado com a infertilidade no macho. Sendo assim, este trabalho possuiu como objetivos tentar melhorar a qualidade do sêmen criopreservado equino através da adição da CoQ-10 ao protocolo de criopreservação, além de avaliar a marcação da proteína ubiquitina e sua relação com os garanhões de alta e baixa qualidade espermática. Levando em consideração esses objetivos, delineou-se dois experimentos. Em ambos foram utilizados 4 garanhões com alta e 4 com baixa qualidade espermática. Cada animal foi submetido a 5 colheitas de sêmen seguidas de congelações. Experimento 1: o sêmen foi criopreservado com a adição de duas concentrações da CoQ-10: 50 µM e 1 mM, a amostra controle foi criopreservada com diluidor Botucrio®. As partidas de sêmen foram analisadas quanto às características de motilidade espermática (CASA), integridades de membrana plasmática, acrossomal e potencial de membrana mitocondrial (através das sondas fluorescentes iodeto de propídeo, Hoechst 33342, JC-1 e FITC-PSA), alterações no citoesqueleto (phalloidin-FITC) e função mitocondrial (DAB). Experimento 2: foram comparadas a quantidade de ubiquitina presente nos espermatozoides de garanhões de alta e baixa qualidade seminal pela técnica de imunofluorescência, além disso foram feitas análises de morfologia espermática (DIC) e correlacionadas com a localização e intensidade de ubiquitina presente nos espermatozoides. Foi possível notar com o experimento 1 que a CoQ- 10 na concentração de 1 mM preservou de maneira mais efetiva as características do sêmen pós-descongelação quando comparada ao controle. Já no experimento 2, foi constatado que garanhões com baixa qualidade espermática possuem maior quantidade de espermatozoides marcados com ubiquitina em seu ejaculado e a localização da ubiquitina em cabeça, peça intermediária e cauda dos espermatozoides está diretamente correlacionada com respectivos defeitos morfológicos encontrados.