Novas estratégias de purificação dos fatores de coagulação Fator VIII e Proteína C a partir de plasma humano empregando cromatografia líquida.

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Iwashita, Claudia
Data de Publicação: 2012
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-01062012-111458/
Resumo: Neste trabalho estudou-se a purificação de fator VIII de coagulação (FVIII) e da Proteína C (PC) por cromatografia. Em coluna ANX Sepharose FF como primeira etapa de purificação do plasma permite a eluição do FVIII e da PC com bom fator de purificação, mas não a separação destas. Propomos a separação de FVIII e PC empregando cromatografia de afinidade a metal (IMAC) empregando Cu2+, Ni2+, Zn2+, Co2+ e Fe3+ e dessorção empregando imidazol, cloreto de amônio e variação de pH. Em colunas de Fe3+ e Ni2+ as proteínas praticamente não se ligaram à resina. Em IMAC-Co2+, a PC não é adsorvida pela resina enquanto o FVIII pode ser eluído com imidazol 100 mM. Em IMAC-Cu2+ a PC eluiu com imidazol 10mM e o FVIII com 200mM. Não foi possível eluir as proteínas nem com NH4Cl 1M nem quando o pH foi abaixado até 4,0. Em IMAC-Zn2+ a PC não é adsorvida e o FVIII eluiu com imidazol 200mM ou NH4Cl 1M. Diminuindo-se o pH, a recuperação da atividade do FVIII foi baixa. Concluímos que IMAC-Co2+ apresentou os melhores rendimentos e melhores fatores de purificação para as 2 protéinas.
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