Produção e caracterização de virus-like particles (VLPs) do vírus Zika produzidas em células de inseto

• Autor(a) principal: Mello, Renata Gois de
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-17052022-133810/
• topic: Baculovírus recombinante; Células Sf9; Recombinant baculovirus; Sf9 cells; Vírus Zika; VLPs; VLPs; Zika virus

As arboviroses se tornaram um grande problema de saúde pública nas regiões tropicais e subtropicais do mundo. O vírus Zika (ZIKV) é uma doença causada por arbovírus, prevalente nas Américas, África e Ásia e tem aumentado sua área de endemicidade em todo o mundo. O diagnóstico da infecção é feito por meio de técnicas moleculares e testes sorológicos. Devido aos avanços das infecções causadas pelo ZIKV, é de extrema importância o desenvolvimento de ferramentas que permitam seu combate adequado. As vacinas de partículas semelhantes a vírus (VLPs) apresentam-se com enorme potencial de uso como vacinas antivirais extremamente eficazes, pois mimetizam a partícula viral, induzindo resposta imune e, por não possuírem o material genético do vírus, não se replicam no organismo, tornando-as seguras como vacinas. Neste trabalho, nós estabelecemos uma metodologia para produção e caracterização de VLPs contendo as proteínas estruturais, C, prM e E, do ZIKV produzidas em células de inseto utilizando o sistema de expressão gênica derivado de baculovírus. Para isso, foi construído o vetor pFast-E-ZIKV contendo as sequências gênicas das proteínas de interesse do ZIKV e este foi utilizado para gerar os bacmídeos recombinantes (Bac-E-ZIKV) através da transformação em células DH10BacTM . O Bac-E-ZIKV gerado foi transfectado em células de inseto Spodoptera frugiperda (Sf9) e lotes de baculovírus recombinantes (BV-E-ZIKV) foram obtidos para ensaios de infecção. Os ensaios de infecção foram realizados com uma multiplicidade de infecção viral (MOI) de 2 do BV-E-ZIKV. As células Sf9 foram infectadas e o sobrenadante foi coletado 96h pós-infecção. A expressão da proteína E-ZIKV na superfície das células pode ser observada por ensaios de imunofluorescência indireta e western blot. Para concentrar e purificar as VLPs produzidas do BV-E-ZIKV testamos os gradientes de sacarose e iodixanol e pudemos avaliar a expressão das proteínas E-ZIKV pelo ensaios de dot blot e western blot. As VLPs foram analisadas e caracterizadas por microscopia eletrônica de transmissão e pudemos observar estruturas esféricas semelhantes ao ZIKV nativo de 50 a 65 nm contendo as proteínas E-ZIKV em sua superfície. Os resultados obtidos neste projeto podem gerar ferramentas importantes no desenvolvimento de um método de vacina contra o ZIKV.