Uso de anticorpos monoclonais na seleção de antígenos lipopolissacárides (LPS) da cepa epidêmica B:4:P1.15 de Neisseria meningitidis B: imunização nasal

• Autor(a) principal: Coutinho, Ligia Maria de Castro Carvalho
• Data de Publicação: 2002
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-02062023-174531/
• topic: Complexo de membrana externa (OMC); Lipolysaccharide (LPS); Lipopolissacáride (LPS); Nasal vaccine; Neisseria meningiditis; Neisseria meningitidis; Outer membrane complex (OMC); Vacina nasal

A alta característica epidêmica e a mortalidade fazem da doença meningocócica um sério problema de saúde pública. Isto fez com que vários centros de pesquisas direcionassem sua atenção para o desenvolvimento de uma vacina contra o meningococo B. As vacinas existentes no momento são contra os sorogrupos A, C, Y e W135. Para conseguir uma vacina segura muitos antígenos da membrana externa bacteriana tomaram-se alvo de estudos. Um dos Componentes que tem sido estudado para ser utilizado em uma preparação vacinai contra Neisseria menigitidis B é o lipopolissacáride (LPS). Lipopolissacárides são macrornotéculas lipoprotêicas que fazem parte da membrana externa das bactérias gram-negativas. O interessante é que muitos estudos com estas moléculas mostraram características adjuvantes na resposta imune contra a N. meningitidis B. Entretanto um problema com estas moléculas é o efeito tóxico que elas causam devido ao lipídio A contido em sua estrutura. O presente estudo teve como finalidade a avaliação da especificidade e capacidade protetora dos anticorpos induzidos em modelo animal com outer membrane components OMC de cepas de N. meningitidis B:4:P1.15 selecionadas por meio de \"colony-blot\" utilizando anticorpos monoclonais anti-L3, 7 ,9 e L8 para maior e menor expressão dos LPS dos imunotipos L3,7,9 e L8. A princípio realizamos a seleção das cepas por \"colony-blot\" para depois procedermos à extração dos componentes de membrana externa bacteriana(OMC) obtidos das cepas selecionadas (B:4:P1.15 L3,7,9↑, B:4:P1.15 L3,7,9↓, B:4:P1.15 L8↑ e B:4:P1.15 L8-↓) e à imunização pela via intranasal (IN) e intramuscular (IM) dos camundongos BALB/c. Nesse estudo foram analisadas: a reatividade homóloga de anticorpos dos isótipos lgM, lgG e lgA presentes nos soros e nas salivas dos camundongos imunizados pelas vias IN e IM e a presença no soro de anticorpos com atividade bactericida. Nos soros de camundongos imunizados pela via IN foram analisadas também a reatividade de anticorpos dos isótipos lgM, lgG e lgA presentes 4 meses e 1 ano após a imunização e a reatividade de anticorpos dos isótipos lgM, lgG e lgA de reatividade cruzada contra suspensão de células bacterianas íntegras das cepas de N. meningitidis heterólogas (B:4:P1.9,B:4:NT, B:14:NT, e C:2a:P1.2). Na análise da presença de anticorpos no soro (obtidos em diferentes dias após a imunização) e na saliva, foi observada a resposta tanto contra suspensão de células bacterianas íntegras como para OMC das cepas selecionadas. Os resultados da dosagem de anticorpos por ELISA mostram que os camundongos imunizados pela via IM produziram altos títulos de anticorpos dos isótipos lgG e os camundongos imunizados pela via IN produziram anticorpos dos isótipos lgG e lgA específicos contra células bacterianas íntegras das cepas homólogas e heterólogas de N. meningitidis. A análise da especificidade por \"Immunoblotting\" dos anticorpos presentes nos soros dos camundongos imunizados pela via IN e IM mostrou que a resposta foi direcionada para proteínas da classe 1,2, e 5 e também para proteínas de 50, 65 e 70 kDa da suspensão de células bacterianas integras e OMC da cepas B:4:P1.15 L3,7,9↑, B:4:P1 .15 L3,7,9↓, B:4:P1.15 L8↑ e B:4:P1.15 L8↓. A especificidade dos anticorpos dos isótipos lgG e lgA (obtidos soros de camundongos imunizados pela via IN) contra cepas B:4:P1.9, B:14:NT, B:4:NT e C:2a:P1.2 mostrou que a resposta foi direcionada principalmente contra proteínas acima de 50 kDa. Na saliva de camundongos imunizados pela via IN, anticorpos do isótipo lgA foram observados por meio de ELISA e \"Immunoblotting\", sendo que por meio de \"Immunoblotting\", verificamos que esta resposta foi direcionada para proteínas de 28 kDa, 33 kDa e acima de 50 kDa. Os resultados apresentados dos ensaios bactericidas mostraram que os grupos de camundongos que receberam imunização pela via IN produziram altos títulos de anticorpos com atividade bactericida contra as cepas homólogas. Quando comparamos as preparações antigênicas obtidas de cepas com maior ou menor expressão dos inunotipos L3,7,9 e L8 não pudemos observar diferenças significativas por meio de ELISA. Entretanto por meio de \"Immunoblotting\" observamos diferenças na especificidade da resposta, especialmente para peptídeos de alto peso molecular. As análises da especificidade dos anticorpos indicam que a seleção de cepas com maior expressão de LPS pode ser importante para iniciar uma resposta efetiva tanto sistêmica como de mucosa quando apresentados em uma preparação vacinai através da via nasal e vem ressaltar a importância do estabelecimento do imunotipo na produção de vacina meningocócica capaz de induzir uma imunidade duradoura em todas as idades tanto pela via mucosa como sistêmica.