Ações de Nef de HIV-1 na maquinaria de tráfego intracelular para neutralizar o fator de restrição SERINC5

• Autor(a) principal: Czernisz, Érika da Silva
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-28062024-145337/
• topic: AP-1; HIV-1; Não informado.; Nef; SERINC5

Nef é uma proteína acessória codificada pelo HIV-1 que aumenta a infectividade das partículas virais. Nef subverte a maquinaria de tráfego de proteínas para robustamente fazer a regulação negativa de moléculas da superfície celular (incluindo CD4 e MHC-I) que são cruciais para o sistema imune do hospedeiro e para o ciclo de replicação viral. Entre os componentes da maquinaria de tráfego de proteínas requeridos para as atividades de Nef estão as proteínas adaptadoras (APs), que são complexos heterotetraméricos que medeiam a seleçao de carga no transporte vesicular de proteínas. Estudos anteriores demonstraram que a proteína do hospedeiro SERINC5 é um inibidor da infectividade do HIV-1 e é neutralizado por Nef. A infectividade de virions contendo SERINC5 é diminuída. Por esse motivo, Nef remove SERINC5 da membrana plasmática prevenindo sua incorporação em novas partículas virais que estão sendo formadas. O presente estudo tem o objetivo de elucidar os mecanismos moleculares envolvidos na regulação do tráfego intracelular utilizados por Nef para prevenir a ação antiviral de SERINC5. Análise de microscopia de imunofluorescência mostrou que na presença de Nef, SERINC5 acumula na região justanuclear e co-localiza com marcadores do complexo de Golgi em células HeLa. Além disso, o acúmulo de SERINC5 na região justanuclear de células expressando Nef é sensível ao inibidor de Arf-GEF, brefeldina A (BFA). A depleção da subunidade γ1 de AP-1 por siRNA compromete a regulação negativa de SERINC5 para a região justanuclear por Nef. Utilizando o ensaio de complementação bimolecular da fluorescência (BiFC), mostramos que Nef interage com a subunidade µ1A da proteína adaptadora 1 (AP-1) do hospedeiro em regiões intracelulares contendo SERINC5. Mostramos também que perturbando a via ESCRT, pela expressão de HRS-GFP como dominante negativo ou de um mutante de VPS4 (VPS4-E/Q), ocorre a redistribuição de SERINC5 regulado negativamente por Nef para endossomos aumentados. Em conjunto, os resultados sugerem que Nef remove SERINC5 dos locais de montagem do HIV-1 alterando o tráfego intracelular de SERINC5 via interação com AP-1. Este estudo contribuiu para um melhor entendimento da ação de Nef contra SERINC5 e sobre a patogênese do HIV-1.