Caracterização da interação e incorporação de fotossensibilizadores em células de Candida albicans para inativação fotodinâmica

• Autor(a) principal: Caface, Raphael Antonio
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-30092020-104341/
• topic: Confocal microscopy; Curcumin; Curcumina; Iluminação seriada; Microscopia confocal; Photodithazine®; Photodithazine®; Serial ilumination

Métodos para o controle microbiológico vem se tornando um desafio atualmente, pois muitos microrganismos apresentam resistência aos medicamentos convencionais, como é o caso da Candida albicans, uma levedura presente no organismo humano que pode ocasionar patologia em mucosas. A inativação fotodinâmica é uma técnica utilizada na descontaminação microbiana e tratamento de infecções. Esta inativação consiste na utilização de um agente fotossensibilizante, luz no comprimento adequado e oxigênio para desencadear a geração de agentes citotóxicos. Neste trabalho foram realizadas análises espectroscópicas, quantificação do crescimento através da absorbância, interação e a ação da molécula Photodithazine® (PDZ) e quatro formulações de curcuminas para internalizar com células de C. albicans. A proposta deste trabalho é caracterizar as células de C. albicans por meios espectroscópicos e estudar a interação com fotossensibilizante com baixas doses de luz, até 20 J.cm-2 e propor um protocolo de iluminação seriado para que torne mais eficiente a aplicação da inativação fotodinâmica. A interação e a ação dos fotossensibilizadores em C. albicans foram estudadas temporalmente através da microscopia de fluorescência confocal com excitação por 1 (1P) e 2 fótons (2P) nos modos canal e espectral e imagens de tempo de vida. Este trabalho demonstra que uma alta internalização pode ser induzida pela luz de excitação para ambos fotossensibilizadores. Esta internalização induzida pode ser realizada em baixas doses de radiação luminosa por 1P e 2P e favorece uma internalização homogênea dos fotossensibilizadores em grandes áreas. Apenas a incorporação induzida com luz intercalada (seriada) levou à morte das células na área iluminada por iluminação 1P e por 2P. Para iluminação em PDZ com laser em 800 nm, a dose de irradiação média necessária para induzir a internalização foi de 8 J.cm-2, enquanto para o laser contínuo de 405 nm, a dose média foi de 9 J.cm-2. Assim, os resultados indicam que realizar uma iluminação seriada com doses baixas (até 1,0 J.cm-2) durante a irradiação de luz induz a internalização acumulativa da concentração do FS através da produção de pequenos danos na parede celular.