Análise microscópica e molecular local e sistêmica de linfócitos T regulatórios em lesões periapicais induzidas experimentalmente em camundongos wild-type e knockout para o receptor TLR2 na presença ou não do ligante Pam3cys

• Autor(a) principal: Almeida, Lana Kei Yamamoto de
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/58/58135/tde-10112023-173334/
• topic: Immunohistochemistry; Imuno-histoquímica; Lesão periapical; Osteoclastogênese; Osteoclastogenesis; Osteoclastos; Osteoclasts; Pam3cys; Pam3cys; Periapical lesion; Tregs; Tregs

O processo infeccioso e inflamatório que ocorre durante a progressão da lesão periapical estimula a ativação de diferentes células, mediadores e receptores do sistema imune do hospedeiro. No contexto de doenças sistêmicas, é reconhecido que o lipopeptídeo sintético denominado Pam3cys atua como ligante de TLR2/TLR1 e, além de estimular a expressão de diferentes citocinas inflamatórias, pode modificar o papel dos linfócitos T regulatórios (Tregs). Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar a participação dos Tregs na presença ou não do ligante Pam3Cys durante a progressão da lesão periapical induzida em camundongos. Foram utilizados 130 camundongos machos C57BL/6 wild type (WT) e knockout para TLR2 (TLR2KO), alocados em grupos controle (n=5) e experimental (indução da lesão periapical) (n=10/período experimental). Em grupos específicos (WT+Pam3cys e TLR2KO+Pam3cys), o ligante sintético Pam3cys foi administrado intraperitonealmente, a cada 7 dias, de acordo com o período experimental (14, 21 e 42 dias). Para os demais grupos, foi administrada água livre de endotoxina. Ao final dos períodos experimentais, os animais foram eutanasiados sendo a mandíbula e o baço submetidos ao processamento histotécnico. Os cortes histológicos foram analisados pela coloração com hematoxilina e eosina (análise da reação inflamatória e mensuração da lesão periapical), pela histoenzimologia para atividade da fosfatase ácida resistente ao tartarato - TRAP (avaliação do número de osteoclastos). Além disso, foi realizada a técnica de imunohistoquímica para a identificação da expressão de Tregs (marcador FOXP3 na mandíbula e no baço) e a avaliação da osteoclastogênese, utilizando os marcadores RANK, RANKL e OPG (mandíbula). Os dados foram analisados pelo programa GraphPad Prism 8.0.1, por meio do teste ANOVA seguido pelo pós-teste de Tukey, Teste T e Teste Mann-Whitney (&alpha;=5%). Foi observado que o infiltrado inflamatório e a reabsorção óssea foram mais intensos no grupo TLR2KO, em comparação com o WT. Além disso, os animais que receberam o ligante Pam3cys, tanto animais WT quanto TLR2KO, apresentaram um infiltrado inflamatório leve ou moderado e lesões periapicais menores (p<0,05). Os animais TLR2KO apresentaram um aumento significativo no número de osteoclastos quando comparado aos animais TLR2KO+Pam3cys (p<0,05), em todos os períodos de desenvolvimento da lesão periapical. Os animais WT+Pam3cys apresentaram menor número de osteoclastos quando comparados aos animais WT que não receberam o ligante, aos 21 dias (p=0,02). A expressão de Tregs foi mais intensa nos grupos que receberam o ligante Pam3cys, com diferença observada principalmente no grupo WT+Pam3cys (p=0,03) quando comparado ao grupo WT, no período de 42 dias. Já nos animais TLR2KO, a administração do ligante não aumentou a proliferação de Tregs. Na análise do baço, os animais WT que receberam o ligante também tiveram maior expressão de Tregs, no período de 14 e 42 dias (p=0.02). Já nos animais TLR2KO, o aumento da expressão de Tregs só aconteceu aos 21 dias (p=0.02) nos animais que receberam o Pam3cys. Com relação ao RANKL, notou-se uma redução da marcação nos grupos TLR2KO+Pam3cys, aos 21 e 42 dias (p=0.03) e maior razão de ligação entre RANK/RANKL nos animais que não receberam o lipopeptídeo. Com relação ao OPG, os animais que receberam a administração do Pam3cys tiveram maior expressão dessa proteína, com diferença estatística no período de 21 dias (p=0.01) para o grupo WT+Pam3cys e para os animais TLR2KO +Pam3cys, essa diferença ocorreu aos 42 dias (p=0.02). A partir das metodologias realizadas e dos resultados, pode-se concluir que nos animais WT, a administração do ligante Pam3cys aumentou a proliferação dos Tregs e preveniu a progressão da lesão periapical em camundongos. Por outro lado, na ausência do receptor TLR2 nos animais KO, a expressão de Tregs foi menor com maiores áreas de lesões periapicais. Por fim, a administração sistêmica do ligante Pam3cys nos animais KO foi capaz de limitar os efeitos deletérios da ausência do receptor TLR2 com menores áreas de lesão periapical, menor expressão de Tregs e RANKL, menor número de osteoclastos e maior expressão de OPG.