Microarquitetura óssea, marcadores epigenéticos e inflamatórios em diferentes modelos experimentais de periodontite
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2022 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP |
Texto Completo: | https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/58/58132/tde-06122022-122959/ |
Resumo: | Introdução: A periodontite é desencadeada por mecanismos do sistema imunoinflamatório. O desafio microbiano sistêmico pode possivelmente induzir diferentes respostas epigenéticas quando comparado a um desafio local. Assim, o objetivo desta pesquisa foi avaliar qual modelo experimental - ligadura ou gavagem - seria mais adequado para analisar alterações epigenéticas no tecido periodontal, acessando microarquitetura óssea, expressão de mediadores de osteoclastogênese e perfil de marcadores epigenéticos. Métodos: A periodontite foi induzida em camundongos C57BL/6 de 6-8 semanas de idade. Os grupos avaliados foram: C - Controle; LIG7 - animal eutanasiado 7 dias após a colocação da ligadura; LIG42 - ligaduras removidas após 7 dias e animais mantidos e eutanasiados após 42 dias; LIG42+GAV - ligadura colocada por 7 dias mais gavagem oral de P. gingivalis e GAV - gavagem oral de P. gingivalis por 3 semanas e animais eutanasiados em 62 dias. A microarquitetura óssea foi medida por Micro-CT, expressão gênica de RANKL e OPG por RT-PCR e padrão de imunocoloração de acetil histona 3 (H3ATs), 4 (H4ATs) e DNA metiltransferase 3 beta (DNMT3b) por imunofluorescência indireta (IF). Resultados: Todos os grupos apresentaram perda óssea em relação ao grupo controle, com o grupo LIG7 apresentando evidentemente os maiores valores. O grupo GAV na maxila apresentou níveis mais elevados de RANK-L em comparação a todos os grupos (p < 0,01). Em OPG, não foram observadas diferenças significativas entre os grupos. No intestino, RANK-L expressou maiores níveis de LIG7 em relação a C (p<0,01) e LIG42 (p<0,01). Em OPG, o grupo LIG7 também foi o mais expresso, apresentando diferença com todos os grupos (p<0,05). Considerando todos os tecidos periodontais como unidades de análise, todos os grupos apresentaram maior marcação de H3ATs e DNMT3b do que o grupo C, mas apenas o grupo GAV expressou níveis significativamente maiores de H4ATs do que o grupo C (p<0,01). No compartimento do epitélio, o grupo GAV apresentou maior expressão de H4ATs (p<0,01) e DNMT3b (p<0,01). Curiosamente, a imunocoloração óssea foi maior para os três marcadores epigenéticos no GAV do que todos os outros grupos, no entanto, estatisticamente significativa apenas para H3ATs (p<0,001) e DNMT3b (p<0,05). Conclusão: Enquanto no modelo de ligadura observa-se uma maior perda óssea, quando a ligadura é removida, a destruição óssea tende a uma restauração espontânea. O desafio microbiano sistêmico foi eficiente e oferece um modelo consistente de periodontite experimental observado pela reabsorção óssea alveolar, caráter imunoinflamatório e características epigenéticas quando comparada à periodontite induzida localmente e pode ser uma melhor estratégia para observar a modulação do hospedeiro. |
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Microarquitetura óssea, marcadores epigenéticos e inflamatórios em diferentes modelos experimentais de periodontiteBone microarchitecture, epigenetic and inflammatory markers in different periodontitis experimental modelsDoença periodontalEpigenéticaEpigeneticsInflamaçãoInflammationModelos experimentais de periodontitePeriodontal diseasePeriodontitis experimental modelsIntrodução: A periodontite é desencadeada por mecanismos do sistema imunoinflamatório. O desafio microbiano sistêmico pode possivelmente induzir diferentes respostas epigenéticas quando comparado a um desafio local. Assim, o objetivo desta pesquisa foi avaliar qual modelo experimental - ligadura ou gavagem - seria mais adequado para analisar alterações epigenéticas no tecido periodontal, acessando microarquitetura óssea, expressão de mediadores de osteoclastogênese e perfil de marcadores epigenéticos. Métodos: A periodontite foi induzida em camundongos C57BL/6 de 6-8 semanas de idade. Os grupos avaliados foram: C - Controle; LIG7 - animal eutanasiado 7 dias após a colocação da ligadura; LIG42 - ligaduras removidas após 7 dias e animais mantidos e eutanasiados após 42 dias; LIG42+GAV - ligadura colocada por 7 dias mais gavagem oral de P. gingivalis e GAV - gavagem oral de P. gingivalis por 3 semanas e animais eutanasiados em 62 dias. A microarquitetura óssea foi medida por Micro-CT, expressão gênica de RANKL e OPG por RT-PCR e padrão de imunocoloração de acetil histona 3 (H3ATs), 4 (H4ATs) e DNA metiltransferase 3 beta (DNMT3b) por imunofluorescência indireta (IF). Resultados: Todos os grupos apresentaram perda óssea em relação ao grupo controle, com o grupo LIG7 apresentando evidentemente os maiores valores. O grupo GAV na maxila apresentou níveis mais elevados de RANK-L em comparação a todos os grupos (p < 0,01). Em OPG, não foram observadas diferenças significativas entre os grupos. No intestino, RANK-L expressou maiores níveis de LIG7 em relação a C (p<0,01) e LIG42 (p<0,01). Em OPG, o grupo LIG7 também foi o mais expresso, apresentando diferença com todos os grupos (p<0,05). Considerando todos os tecidos periodontais como unidades de análise, todos os grupos apresentaram maior marcação de H3ATs e DNMT3b do que o grupo C, mas apenas o grupo GAV expressou níveis significativamente maiores de H4ATs do que o grupo C (p<0,01). No compartimento do epitélio, o grupo GAV apresentou maior expressão de H4ATs (p<0,01) e DNMT3b (p<0,01). Curiosamente, a imunocoloração óssea foi maior para os três marcadores epigenéticos no GAV do que todos os outros grupos, no entanto, estatisticamente significativa apenas para H3ATs (p<0,001) e DNMT3b (p<0,05). Conclusão: Enquanto no modelo de ligadura observa-se uma maior perda óssea, quando a ligadura é removida, a destruição óssea tende a uma restauração espontânea. O desafio microbiano sistêmico foi eficiente e oferece um modelo consistente de periodontite experimental observado pela reabsorção óssea alveolar, caráter imunoinflamatório e características epigenéticas quando comparada à periodontite induzida localmente e pode ser uma melhor estratégia para observar a modulação do hospedeiro.Introduction: Periodontitis is triggered by mechanisms of immunoinflammatory system. Systemic microbial challenge can possibly induce different epigenetic responses when compared to a local challenge. Thus, the objective of this research was to evaluate which experimental model - ligature or gavage - would be more suitable to analyze epigenetic changes in periodontal tissue, accessing bone microarchitecture, osteoclastogenesis mediators expression and epigenetic markers profile. Methods: Periodontitis was induced in 6-8-weekold C57BL/6 mice. The evaluated groups were: C - Control; LIG7 - animal euthanized 7 days after ligature placement; LIG42 - ligatures removed after 7 days and animals euthanized after 42 days; LIG42+GAV - ligature placed for 7 days plus oral gavage of P. gingivalis and GAV - oral gavage of P. gingivalis. Bone microarchitecture was measured by Micro-CT, RANKL and OPG gene expression by RT-PCR and immunostaining pattern of acetyl histone 3 (H3ATs), 4 (H4ATs) and DNA methyltransferase 3 beta (DNMT3b) by indirect immunofluorescence (IF). Results: All groups exhibited bone loss compared to control group, with LIG7 showing the greater values. The GAV group in maxilla had higher levels of RANK-L compared to all groups (p < 0.01). In OPG, no significant differences were observed between the groups. In intestine, RANK-L expressed higher levels in LIG7 in relation to C (p<0.01) and LIG42 (p<0.01). In OPG, the LIG7 group was also the most expressed, showing a difference with all groups (p<0.05). Considering all the periodontal tissues as units of analysis, all groups displayed higher labeling of H3 and DNMT3 than the C group, but only the GAV group expressed significant higher levels of H4 than the C group (p<0.01). The epithelium compartment, the GAV group showed greater expression of H4 (p<0.01) and DNMT3b (p<0.01). Interestingly, bone immunostaining was higher for the three epigenetic markers in GAV than all other groups, however, it was only statistically significant for H3 (p<0.001) and DNMT3 (p<0.05). Conclusion: While in ligature model a greater bone loss is observed, when the ligature is removed, the bone destruction tendency to spontaneous restoration. The systemic microbial challenge was efficient and offers a consistent model of experimental periodontitis observed by alveolar bone resorption, immune inflammatory character and epigenetic features when compared to locally induced periodontitis and may be a better strategy to observe host modulation.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPBulle, Daniela Bazan PaliotoAlmeida, Ana Clara Portela de2022-08-25info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/58/58132/tde-06122022-122959/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2022-12-07T12:56:55Zoai:teses.usp.br:tde-06122022-122959Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212022-12-07T12:56:55Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false |
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Introdução: A periodontite é desencadeada por mecanismos do sistema imunoinflamatório. O desafio microbiano sistêmico pode possivelmente induzir diferentes respostas epigenéticas quando comparado a um desafio local. Assim, o objetivo desta pesquisa foi avaliar qual modelo experimental - ligadura ou gavagem - seria mais adequado para analisar alterações epigenéticas no tecido periodontal, acessando microarquitetura óssea, expressão de mediadores de osteoclastogênese e perfil de marcadores epigenéticos. Métodos: A periodontite foi induzida em camundongos C57BL/6 de 6-8 semanas de idade. Os grupos avaliados foram: C - Controle; LIG7 - animal eutanasiado 7 dias após a colocação da ligadura; LIG42 - ligaduras removidas após 7 dias e animais mantidos e eutanasiados após 42 dias; LIG42+GAV - ligadura colocada por 7 dias mais gavagem oral de P. gingivalis e GAV - gavagem oral de P. gingivalis por 3 semanas e animais eutanasiados em 62 dias. A microarquitetura óssea foi medida por Micro-CT, expressão gênica de RANKL e OPG por RT-PCR e padrão de imunocoloração de acetil histona 3 (H3ATs), 4 (H4ATs) e DNA metiltransferase 3 beta (DNMT3b) por imunofluorescência indireta (IF). Resultados: Todos os grupos apresentaram perda óssea em relação ao grupo controle, com o grupo LIG7 apresentando evidentemente os maiores valores. O grupo GAV na maxila apresentou níveis mais elevados de RANK-L em comparação a todos os grupos (p < 0,01). Em OPG, não foram observadas diferenças significativas entre os grupos. No intestino, RANK-L expressou maiores níveis de LIG7 em relação a C (p<0,01) e LIG42 (p<0,01). Em OPG, o grupo LIG7 também foi o mais expresso, apresentando diferença com todos os grupos (p<0,05). Considerando todos os tecidos periodontais como unidades de análise, todos os grupos apresentaram maior marcação de H3ATs e DNMT3b do que o grupo C, mas apenas o grupo GAV expressou níveis significativamente maiores de H4ATs do que o grupo C (p<0,01). No compartimento do epitélio, o grupo GAV apresentou maior expressão de H4ATs (p<0,01) e DNMT3b (p<0,01). Curiosamente, a imunocoloração óssea foi maior para os três marcadores epigenéticos no GAV do que todos os outros grupos, no entanto, estatisticamente significativa apenas para H3ATs (p<0,001) e DNMT3b (p<0,05). Conclusão: Enquanto no modelo de ligadura observa-se uma maior perda óssea, quando a ligadura é removida, a destruição óssea tende a uma restauração espontânea. O desafio microbiano sistêmico foi eficiente e oferece um modelo consistente de periodontite experimental observado pela reabsorção óssea alveolar, caráter imunoinflamatório e características epigenéticas quando comparada à periodontite induzida localmente e pode ser uma melhor estratégia para observar a modulação do hospedeiro. |
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