Produção e caracterização da porção Fab do anticorpo anti-digoxina utilizando a tecnologia de phage display.

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Murata, Viviane Midori
Data de Publicação: 2012
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-11062012-083314/
Resumo: A digoxina é um medicamento usado para tratar distúrbios cardíacos, com janela terapêutica muito estreita. Para combater seu efeito tóxico, fragmentos Fab do anticorpo policlonal anti-digoxina estão disponíveis comercialmente. Nosso objetivo foi a obtenção de variantes de fragmentos Fab do anticorpo monoclonal anti-digoxina usando a tecnologia phage display, que permite gerar fragmentos de anticorpos de alta afinidade e especificidade. Uma biblioteca combinatória de fragmentos Fab anti-digoxina foi construída no vetor pComb3X a partir do RNA total do hibridoma anti-digoxina. Seis clones foram isolados, todos com sequência idêntica na cadeia pesada. A cadeia leve apresentou 2 clones idênticos, um pseudogene e um clone com um aminoácido distinto no CDR2. Quatro clones apresentando variações na sequência do framework1 da cadeia leve foram expressos como fragmentos Fab solúveis. Todos apresentaram ligação à digoxina-BSA por ELISA e Western blotting. A ligação específica do anticorpo também foi confirmada pelo BIAcore, que permitiu ranqueamento entre os clones.
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