Construção de clones recombinantes de Bacillus subtilis por fusão dos genes CotC de endósporo e MCP (Major Capsid Protein) de isolado brasileiro de Ranavirus

• Autor(a) principal: Navarro, Juliana de Oliveira
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/74/74135/tde-29022024-092129/
• topic: Bacillus sutilis; Bacillus sutilis; Ranavirus; Ranavirus; Spore surface display; Spore surface display; Vaccine; Vacinas

Recombinação genética é um dos principais mecanismos que impulsionam o processo de obtenção de novas proteínas com fins biotecnológicos, podendo-se destacar a utilização de cepas recombinantes de Bacillus subtilis para a produção de vacinas baseadas em subunidades proteicas. Em termos de profilaxia, essa estratégia pode ser aplicada à prevenção contra infecções por Ranavirus, representando uma abordagem inovadora e versátil. As ranaviroses são doenças causadas por vírus do gênero Ranavirus, pertencente à família Iridovidae, que reúne patógenos emergentes capazes de infectar três classes de vertebrados: peixes ósseos, anfíbios e répteis. Surtos de ranavirose associada a estirpes de Frog virus 3 (FV3) podem apresentar alta mortalidade, causando prejuízos consideráveis na ranicultura. Nesse sentido, o presente estudo teve como objetivo a construção de clones recombinantes de Bacillus subtilis por meio da fusão gênica dos genes CotC, associado à proteína do revestimento externo do endósporo de B. subtilis, e MCP (Major Capsid Protein), que codifica a proteína principal do capsídeo, de estirpe brasileira de Ranavirus. Foram desenhados primers específicos para amplificação dos genes CotC e MCP. A amplificação do gene CotC foi obtida de uma cepa parental de Bacillus subtilis. A partir de estirpe de FV3, pertencente ao biobanco do Laboratório de Higiene Zootécnica da FZEA-USP, realizou-se a amplificação do gene MCP. Utilizou-se o produto dessas amplificações para realizar a PCR de fusão, sendo confirmada por sequenciamento nucleotídico. Os produtos da PCR de fusão foram clonados no plasmídeo pDG1662 e inseridos em cepas competentes de Bacillus subtilis, sendo a confirmação dos novos clones, denominados de pDGCMCP, também confirmadas por sequenciamento nucleotídico. A obtenção de cepa recombinante de B. subtilis para MCP de ranavírus, por meio da técnica de spore surface display, utilizada no presente estudo, é etapa essencial no desenvolvimento de vacinas de nova geração contra a ranavirose.