A expressão do TERRA é desregulada na leucemia mieloide aguda

• Autor(a) principal: Catto, Luiz Fernando Bazzo
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17153/tde-11042023-093527/
• topic: Acute myeloid leukemia; Leucemia mieloide aguda; R-loops; R-loops; Telomerase; Telomerase; Telomere; Telômeros; TERRA; TERRA

Os telômeros compõem as extremidades dos cromossomos lineares e são responsáveis por manter a integralidade genômica. As regiões subtelomérica e teloméricas são transcritas em RNAs longo não codificantes denominados TERRA (TElomeric Repeat containing RNA). Os TERRAs formam híbridos de DNA-RNA denominados R-loops e estão envolvidos na manutenção e estabilização do telômero, alongamento telomérico por vias dependentes e independentes da telomerase e controle transcricional. Os R-loops devem ser mantidos em níveis ideais, tanto alto quanto baixos níveis de R-loops estão relacionados a lesão do DNA e encurtamento telomérico. Este estudo teve como objetivo avaliar a expressão de TERRA em leucemias mieloides agudas (LMAs). Também foram avaliadas as expressões de genes relacionados a dinâmica telomérica (TERT, TRF2), controle dos R-loops (RNaseH1, RNaseH2) e dinâmica da transcrição dos TERRAs (TRF2, ATRX). A análise por clusterização hierárquica baseada na expressão de TERRA demonstrou que existem dois grupos de LMA, um com alta expressão de TERRA e outro com baixa expressão de TERRA. Ambos os grupos apresentam comprimento telomérico curto, alta expressão de TRF2, RNaseH1 e ATRX. O grupo com alta expressão de TERRA apresenta menor expressão de RNaseH2 (p < 0,05), enzima essencial para a diminuição dos R-loops durante a fase S, e de TERT (p < 0,05). Neste grupo, a baixa expressão de RNaseH2 pode favorecer o acúmulo de R-loops, aumento da quebra de DNA e a ativação de vias alternativas de alongamento telomérico independente da telomerase. Em relação a caracterização citogenética molecular dos grupos de LMAs, o grupo com alta expressão de TERRA se caracteriza por uma baixa prevalência de mutações em fatores de splicing. Baseado na prevalência dos diferentes subtipos de LMA da nossa coorte, foram selecionadas duas linhagens celulares, NB4, uma linhagem de leucemia promielocítica aguda, e THP1, uma linhagem de leucemia mielomonocítica a fim de estudar a importância dos R-loops na manutenção dessas linhagens. As linhagens foram transduzidas com vetores lentivirais contendo RNaseH1-GFP ou apenas GFP. As linhagens transduzidas com vetor lentiviral RNaseH1-GFP apresentaram alta expressão de RNaseH1 (p < 0,05) e maior quimiossensibilidade a citarabina (p < 0,05) . Este resultado indica que a inibição dos R-loops é um potencial alvo terapêutica nas LMAs.