Desenvolvimento de métodos de geração de imagem por espectrometria de massas (MALDI e DESI-MSI) aplicados a modelos in vitro e in vivo de permeação cutânea e sistema nervoso central

• Autor(a) principal: Buqui, Gabriela Amaral
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60138/tde-30062017-164515/
• topic: DESI- MSI; DESI-MSI; Goyazensolide; Goyazensolido; MALDI-MSI; MALDI-MSI

A química de produtos naturais da família Asteraceae tem sido foco de estudo do Núcleo de Pesquisa em Produtos Naturais e Sintéticos (NPPNS) da FCFRP-USP que relatou diversas novas moléculas, com destaque para a classe das lactonas sesquiterpênicas. Para essas substâncias já foram atribuídas diversas atividades farmacológicas tais como antioxidante, anti-inflamatória, antimicrobiana, analgésicas e tripanossomicida. A atividade antitumoral da lactona sesquiterpênica goyazensolido (GOYA) foi avaliada no NPPNS e esse estudo revelou uma atividade farmacológica interessante paras as linhagens de tumor cutâneo e cerebral. Com isso, viu-se nesta classe de substâncias uma oportunidade para explorar o potencial antitumoral assim como sua distribuição e metabolismo. Para compreender melhor a distribuição dessa substância na pele, o modelo in vitro de penetração utilizando células de Franz e pele de orelha de porco como membrana foi aplicado. Para esse estudo um método de geração de imagem MALDI-MSI para avaliação da distribuição do GOYA na pele, assim como, um método por UPLC-MS/MS foram desenvolvidos. Para o desenvolvimento e validação do método de MALDI-MS as substâncias doxorrubicina e minoxidil, com estudos de penetração já estabelecidos, foram utilizadas. Para avaliação da distribuição de GOYA em sistema nervoso central (SNC) um modelo em insetos, utilizando gafanhotos foi aplicado. Nesse experimento os gafanhotos receberam a dose de 500 ?M de GOYA, e foram coletadas amostras de hemolinfa, fezes e cérebro nos tempos de 15 e 30 minutos, assim como amostras de gafanhoto total. Para determinação de GOYA nas amostras de gafanhoto um método quantitativo por UPLC-MS/MS e um método de geração de imagem por DESI-MSI foram desenvolvidos. Com os estudos de penetração cutânea pudemos concluir que MALDI-MSI foi capaz de confirmar a distribuição de minoxidil nas amostras de pele, no entanto, não se mostrou uma técnica eficaz para determinação de doxorrubicina. A técnica de MALDI-MSI, em adição ao método de UPLC-MS/MS foi capaz de revelar que o GOYA não penetrou na pele estando acumulado na sua camada superior, provavelmente no estrato córneo. Nos ensaios de distribuição em SNC foi possível observar através do método de UPLC-MS/MS que o GOYA está presente no cérebro, hemolinfa e fezes do gafanhoto. Com isso podemos concluir que o modelo utilizado é um bom modelo de predição de permeação a barreira-hematoencefálica, bem como para estudos de metabolismo. Conclui-se também que o método desenvolvido para essa finalidade foi adequado. A técnica de DESI-MS apesar de não gerar resultados positivos para permeação cerebral revelou a presença de GOYA no intestino do animal no tempo de 30 minutos, o que caracteriza uma rápida eliminação de GOYA do organismo