Triagem para a identificação de novos compostos com atividade sobre linhagem celular infectada pelo HTLV-1

• Autor(a) principal: Santos, Daiane Fernanda dos
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17154/tde-22112018-081731/
• topic: apoptose; apoptosis; cell proliferation; drug screening; HTLV-1; HTLV-1; proliferação celular; Tax; Tax; triagem de drogas

O vírus linfotrópico de células T humanas do tipo 1 (HTLV-1) é um retrovírus associado a duas manifestações clínicas principais: i) mielopatia associada ao HTLV- 1/paraparesia espástica tropical (HAM/TSP) e a ii) leucemia/linfoma de células T do adulto (ATL). Devido à ausência de tratamentos específicos e efetivos, faz-se necessário o desenvolvimento de novas drogas para o tratamento das doenças associadas ao HTLV-1. Nesse sentido, nosso objetivo foi realizar a triagem de compostos químicos para identificar indutores de apoptose e/ou bloqueadores da proliferação celular em linhagem celular infectada pelo HTLV-1 (MT-2), bem como drogas com efeito sobre a atividade de Tax viral. Inicialmente, foi estabelecido um ensaio baseado em células, o qual permitiu realizar a triagem de compostos pelo método de redução da resazurina. A partir de 26 derivados 1,2,3-triazólicos, oito compostos (hits) apresentaram atividade >= 70% por reduzirem de forma significativa a atividade metabólica da MT-2. Tais hits foram selecionados para as etapas de validação. O composto 61 foi o único a induzir uma parada na fase S do ciclo celular, enquanto os compostos 48, 49, 65 e 66 induziram a apoptose da linhagem MT-2. Na avaliação do efeito dos compostos sobre a atividade da proteína viral Tax, uma linhagem repórter com a expressão induzida de Tax foi estabelecida. Verificamos que apenas os compostos 48 e 49 foram capazes de reduzir a expressão de GFP, e consequentemente, interferir na atividade de Tax. Uma biblioteca de 707 compostos do NIH também foi avaliada neste estudo. A partir da triagem primária, 34 compostos (hits) com atividade >= 50% foram obtidos, enquanto na triagem secundária, apenas cinco hits foram confirmados. Entretanto, apenas dois destes foram selecionados para as futuras etapas de validação (dissulfiram e bromidrato de galantamina). Por fim, exceto os compostos 65 e 66, os demais hits não interferiram na viabilidade da linhagem hepática Huh-7. Os resultados deste estudo mostraram que os compostos 48, 49, 61, dissulfiram e bromidrato de galantamina deveriam ser explorados como novas abordagens terapêuticas das doenças associadas ao HTLV-1.