Estratégias de busca de genótipos variantes do gene RHCE em doadores de sangue afrodescendentes

• Autor(a) principal: Almeida, Fabio Augusto Abreu de
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/99/99131/tde-06022020-124608/
• topic: African-descent; Afrodescendentes; Biologia molecular; Blood donors; Blood groups; Doadores de sangue; Genética; Genetics; Grupos sanguíneos; Molecular biology; Polimorfismo; Polymorphism

Introdução: O sistema Rh é o maior e mais complexo sistema de grupos sanguíneos, sendo composto por 55 antígenos codificados pelos genes RHD e RHCE (lócus RH), que são altamente homólogos e pleomórficos. O lócus RH apresenta alta prevalência de rearranjos gênicos e mutações de ponto em população de ancestralidade africana, que é representada, na prática transfusional, principalmente pelos pacientes portadores da doença falciforme. Essas variações gênicas originam os alelos variantes de RH, que podem levar, entre outros efeitos, à expressão de antígenos parciais, com perda de epítopos imunogênicos, e à perda de expressão de antígenos de alta frequência do sistema Rh, predispondo os pacientes à aloimunização com eventual necessidade de transfusão de unidades provenientes de doadores raros com fenótipos Rh variantes ou Rh nulo. Objetivos: 1) Padronizar estratégia de rastreamento das variantes do gene RHCE mais frequentemente identificadas em população com doença falciforme dentre doadores de sangue brasileiros autodeclarados negros, visando a atender aos pacientes aloimunizados que necessitem de transfusões de unidades variante-idênticas ou negativas para antígenos de alta frequência do sistema Rh e 2) Avaliar se a inclusão do genótipo nulo do sistema Duffy (FY*02N.01/FY*02N.01) na seleção de doadores aumenta a eficácia de identificação de genótipos RH variantes. Metodologia: Foram selecionados 217 doadores de sangue autodeclarados negros com os fenótipos R1r e R0r. Em 214 amostras foi realizada a genotipagem do polimorfismo c.-67T>C da região promotora do gene FY (alelo FY*02N.01), que é informativo de ancestralidade africana e que, em homozigose, configura o genótipo Duffy nulo. Em seguida, foi realizada a amplificação e sequenciamento direto (método de Sanger) dos éxons 1, 5, 6 e 7 do gene RHCE, que contêm mutações chaves para as seguintes variantes: RHCE*ce.01, RHCE*ceVS.01, RHCE*ceVS.02, RHCE*ceVS.03, RHCE*ceVS.05, RHCE*ceAR, RHCE*ceEK, RHCE*ceMO, RHCE*ceCF, RHCE*ceTI e RHCE*ceSM. Os doadores portadores dos alelos RHCE*ceVS.03 ou RHCE*ceVS.05 foram submetidos a PCR multiplex para detecção do haplótipo hibrido (C)ceS. Resultados: Do total de doadores inclusos (n=217), 140 (140/217, 64,5%) apresentaram ao menos um alelo RHCE mutado. Os alelos variantes mais comuns foram: RHCE*ce.01 (55/434, 12,7%) e RHCE*ceVS.01 (54/434, 12,4%). Foram identificados 47 doadores (47/217, 21,6%) com genótipos RHCE de relevância clinica (codificando antígenos parciais ou ausência de antígenos de alta frequência) e, destes, doze doadores (12/217, 5,5%) apresentaram ausência de antígenos de alta frequência do sistema Rh (hrB ou hrS). Oito doadores (8/12, 66,6%) que apresentaram ausência de antígenos de alta frequência possuíam o genótipo Duffy nulo. Conclusões: A estratégia de selecionar doadores autodeclarados negros e com os fenótipos R1r e R0r mostrou-se viável e eficaz para identificar genótipos variantes de RHCE na população brasileira. A inclusão do genótipo Duffy nulo como critério de seleção dos doadores mostrou ser boa alternativa para a busca de genótipos que levam à perda de expressão de antígenos de alta frequência. Os doadores variantes de RHCE identificados poderão atender a demanda transfusional dos pacientes aloimunizados que necessitem de transfusões de unidades variante-idênticas ou negativas para antígenos de alta frequência do sistema Rh.