Planejamento do tipo Plackett-Burman no preparo de amostras de líquido cefalorraquidiano para estudo lipidômico

• Autor(a) principal: Damasceno, Fábio Aparecido
• Data de Publicação: 2024
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75135/tde-11062024-090132/
• topic: esclerose múltipla; espectrometria de massas; experimental design experiments; lipidômica; lipidomics; mass spectrometry; microextração em fase sólida; multiple sclerosis; planejamento experimental; solid phase microextraction

A proposta deste trabalho contemplou a investigação de condições de Microextração em Fase Sólida (SPME) empregando o Planejamento do tipo Plackett-Burman no preparo de amostras de líquido cefalorraquidiano de pacientes diagnosticados com Esclerose Múltipla (MtS) para análise em espectrômetro de massas de alta resolução. Pelos testes realizados preliminarmente, pôde-se constatar a heterocetasticidade dos dados e que os coeficientes de variação obtidos para as quatro faixas de m/z selecionadas para trabalho (m/z 50-600, 300-800, 700-2000 e 1000-2000) são comparáveis e variaram de 17 a 36%, tais testes também mostraram que as condições centrais dos níveis dos fatores triados foram visualmente comparáveis com os perfis espectrais obtidos pelo método de referência (Bligh e Dyer). A realização do Planejamento do tipo Plackett-Burman assistido pela função de desejabilidade para maximização da variável resposta (número de íons) mostraram que não é possível obter um modelo global que contemple as quatro faixas simultaneamente, a partir dos níveis testados, gerando uma condição de compromisso para a extração utilizando SPME: 5 min de extração e 5 min de dessorção a 30°C sem agitação em 150µL de metanol. Foi utilizado um threshold de 30% em relação ao sinal mais intenso em cada espectro obtido nas amostras de pacientes com MtS e pacientes do grupo de controle, tendo em vista as janelas de aquisição de dados nas faixas de 50-600 m/z, 300-800 m/z, 700-2000 m/z e 1000-2000 m/z, resultando em espectros com íons em ordem de grandeza entre 105 e 107. A análise de componentes principais aponta a influência de uma diversidade de relações m/z sobre a auto-organização dos dados, que permite inferir a ausência de marcadores específicos. A PCA resultou em 8 componentes principais sem um delineamento definitivo de agrupamentos, mas com quatro amostras com perfil completamente distinto das demais. Foi utilizado o software MZMine 3 para previsão de possíveis íons de estruturas lipídicas empregando dados MS1, indicando a maior potencialidade do software principalmente com dados MS2 e acoplamento de técnicas de separação à espectrometria de massas para análises lipidômicas futuras.